3. Ý nghĩa khoa học của đề tài
2.4.2.Phương pháp thí nghiệm
a) Vật liệu thí nghiệm
Hóa chất: Hóa chất sử dụng là Natri hypochlorite (NaOCl) tinh khiết. Nước thí nghiệm: Sử dụng nước cấp của thành phố Đà Nẵng, nước được để trên 24h khử bớt Clo trước khi dùng.
Cá: được mua từ cửa hàng cá cảnh, thuần dưỡng trong bể 80 lít trong vòng 1 tuần. Trước khi làm thí nghiệm, ngừng cho ăn một ngày để hạn chế phân cá làm ô nhiễm nước.
Hồ chứa cá: Thí nghiệm sử dụng 24 hộp nhựa có nắp đậy, kích thước: chiều ngang 15 cm, chiều dài 25 cm và cao 20 cm chứa 3 lít nước trong mỗi lô thí nghiệm.
b) Bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm thăm dò
Để xác định được ngưỡng chịu đựng của từng loài cá đối với NaOCl, tiến hành thí nghiệm thăm dò
Thí nghiệm được tiến hành trên hồ chứa 3 lít nước, mật độ cá là 4 con/ bể, ở từng nồng độ không có sự lặp lại. Sục khí liên tục trong 24h để đảm bảo cá đủ oxy, không thay nước và không cho cá ăn trước khi thực hiện thí nghiệm 1 ngày và trong quá trình thực hiện thí nghiệm. Thí nghiệm được theo dõi và khi phát hiện cá chết, ghi nhận số liệu rồi vớt cá ra để hạn chế ảnh
hưởng đến chất lượng nước.
Hình 2.4. Bố trí thí nghiệm thăm dò của cá Ngựa vằn
Bố trí thí nghiệm với các dãy nồng độ theo bảng 2.1., các dãy nồng độ này được xác định dựa trên những nghiên cứu liên quan trước đây.
Bảng 2.1. Dãy nồng độ NaOCl (mg/L) trong thí nghiệm thăm dò
Cá Ngựa vằn Cá Tứ vân Cá Hòa lan
23,67 33,33 43,33 30,00 40,00 46,67 36,67 50,00 53,33 41,67 55,00 60,00 43,33 60,00 67,67 48,33 67,67 70,00 58,33 83,33 83,33 61,67 100,00 100,00 Thí nghiệm xác định LC50-24h
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên (RCD) với các nồng độ được xác định từ thí nghiệm thăm dò, tiến hành thí nghiệm với dãy năm nồng độ natri hipoclorit (NaOCl) (dãy nồng độ được trình bày ở bảng 2.2.) và đối chứng. Với mỗi nồng độ lặp lại 4 lô, mỗi lô có 10 con cá/3lít nước. Thí nghiệm được thực hiện theo phương pháp tĩnh trong 24h, sục khí thường xuyên. Thí nghiệm được theo dõi và khi phát hiện cá chết, ghi nhận số liệu rồi vớt cá ra để hạn chế ảnh hưởng đến chất lượng nước.
Bảng 2.2. Kí hiệu các lô thí nghiệm
(Chú thích: NVĐ 1, 2, 3, 4: là 4 lô cá Ngựa vằn đối chứng; NV 1.1, 1.2, 1.3, 1.4: là 4 lô cá Ngựa vằn ở nồng độ NaOCl thứ nhất, tương tự với các nồng độ tiếp theo. Cá Tứ vân (TV), Hòa lan (HL) kí hiệu tương tự như cá Ngựa vằn.)
Nhiệt độ, oxy hòa tan, pH được đo lúc bắt đầu và kết thúc thí nghiệm trong ngày thực hiện thí nghiệm, để theo dõi sự ảnh hưởng của các yếu tố đến kết quả thí nghiệm [40], [47]. Các yếu tố này được đo bằng máy đo đa chỉ tiêu nước YSI 6920 V2.
Thí nghiệm được thực hiện theo hướng dẫn của OECD (Organization for Economic Cooperation and Development) về hóa chất và cá trong thí nghiệm độc tính cấp tính [47].