Để kiểm tra khả năng mang 3 gen kháng bạc lá Xa4, xa5, Xa7 của các mẫu giống lúa, chúng tôi tiến hành PCR xác định gen kháng sử dụng các cặp mồi có trình tự như đã nêu ở Mục 3.3.3, phần phương pháp nghiên cứu.
Các đối chứng được sử dụng là các dòng đẳng gen IRBB4, IRBB5, IRBB7 (đối chứng dương có chứa gen kháng) và IR24 (đối chứng âm không chứa gen kháng).
Trong phản ứng PCR xác định gen kháng, các gen kháng được xác định bằng cách so sánh kích cỡ vệt băng nhân lên của mẫu với kích thước vệt băng của đối chứng từ đó đưa ra kết luận về gen kháng của mẫu.
Cụ thể như sau:
Đối với gen Xa4 với cặp mồi MP2, thì kích thước vệt băng nếu mẫu chứa gen Xa4 là 150bp, không chứa gen Xa4 là 120bp.
1. ladder
2. IR24, đối chứng âm 3. IRBB4, đối chứng dương 4. 10001 5. 10051 6. 10002 7. 10060 8. 10079 9. 10790 10. 10795 11. 10792 12. 10796 13. 10798
(Những mẫu giống in đậm là chứa gen kháng)
Hình 6. Điện di sản phẩm PCR phát hiện gen Xa4, sử dụng cặp mồi MP2
Kết quả chúng tôi xác định được 21 mẫu giống mang gen Xa4
Đối với gen Xa7 với cặp mồi P3, thì kích thước vệt băng nếu mẫu chứa gen
Xa7 là 297bp, không chứa gen Xa7 là 262 bp.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
150 120
1. ladder
2. IR24, đối chứng âm 3. IRBB7, đối chứng dương 4. 10001 5. 10002 6. 10051 7. 10060 8. 10061 9. 10076 10. 10790 11. 10792 12. 10079 13. 10139 14. 10152 15. 10278 16. 10780 17. 10781
(Những mẫu giống in đậm là chứa gen kháng)
Hình 7. Điện di sản phẩm PCR phát hiện gen Xa7, sử dụng cặp mồi P3
Kết quả xác định được 23 mẫu giống mang gen Xa7
Đối với gen xa5 sử dụng cặp mồi RG556 và enzyme DraI, sản phẩm PCR của mẫu mang gen lặn xa5 sau khi cắt bằng enzyme sẽ xuất hiện vạch băng kép tại kích thước khoảng 450bp.
Hình 8. Điện di sản phẩm PCR phát hiện gen xa5, sử dụng cặp mồi RG556 trước cắt enzym DraI
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 297 bp
1. ladder
2. IR24, đối chứng âm 3. IRBB5, đối chứng dương 4. 10001 5. 10061 6. 10274 7. 10788 8. 10800 9. 10803 10. 10002
(Những mẫu giống in đậm là chứa gen kháng)
Hình 9. Điện di sản phẩm PCR phát hiện gen xa5, sử dụng cặp mồi RG556sau khi cắt enzym DraI
Kết quả, chúng tôi xác định được 6 mẫu giống mang gen xa5 Đặc biệt kết quả thu được:
+ 2 mẫu giống kí hiệu 10800 và 10803 chứa cả 3 gen Xa4, xa5 và Xa7 + 1 mẫu giống kí hiệu 10293 chứa 2 gen xa5 và Xa7
+ 6 mẫu giống kí hiệu 10173, 10275, 10282, 10288, 10795 và 10796 chứa 2 gen Xa4 và Xa7.