Để tiến hành phát hiện nhanh đồng thời các vi sinh vật lựa chọn trong thời gian ngắn nhất với độ nhạy cao của quy trình thì bước tăng sinh đồng thời các vi sinh vật là bước rất cần thiết. Tuy nhiên không phải bất cứ môi trường tăng sinh nào cũng phù hợp cho đồng thời các vi sinh vật lứa chọn. Vì vậy với mật độ tế bào vi sinh vật là 1CFU/25ml trong mẫu thí nghệm thì việc lựa chọn một môi trường tăng sinh thích hợp đồng thời cho các vi sinh vật chọn lọc rất quan trọng. Bước này giúp ta thu được mật độ tế bào các vi sinh vật đủ lớn để thực hiện phản ứng Real time PCR từ một mật độ rất thấp của mẫu thí nghiệm 1CFU/25ml. Thời gian tăng sinh là 4 giờ, tiến hành tăng sinh các vi sinh vật thu được sau khi ly tâm trong các môi trường đã lựa chọn.
Tuy nhiên, với mật độ vi sinh vật ban đầu là 1 CFU/25ml, thì sau 4 giờ tăng sinh mật độ vi sinh vật vẫn còn thấp, nên việc xác định mật độ vi sinh vật bằng phương pháp đếm khuẩn lạc truyền thống gặp khó khăn, bên cạnh đó cũng khó đánh giá sự khác nhau trong hiệu quả tăng sinh của các môi trường. Vì vậy, trong thí nghiệm lựa chọn môi trường này, em sẽ tiến hành với mật độ vi sinh vật ban đầu của mẫu thí nghiệm là 10 CFU/ml.
Với 4 môi trường được lựa chọn để tăng sinh vi sinh vật TSBYE
Letheen Broth
Fluid Thioglycollate Medium Nutrient Broth
Milk ( sữa tươi tiệt trùng)
Mật độ vi sinh vật ban đầu trong mẫu thí nghiệm là 10CFU/ ml, sau 4 giờ tăng sinh trên các môi trường khác nhau, bằng phương pháp đếm khuẩn lạc truyền thống ta xác định được mật độ vi sinh vật như kết quả sau:
Stt Môi trường E.Coli
(CFU/ml)
Bacillus
(CFU/ml) 1 Trypticase soy broth yeast extract 21200 21600
2 Letheen Broth 25700 31500
3 Fluid Thioglycollate Medium 8300 18900
4 Nutrient Broth 23600 11200
5 Terrific Broth 13600 9800
6 Sữa tươi tiệt trùng 41000 30800
Bảng 4. Kết quả lựa chọn môi trường tăng sinh
Với mục đích thu được mật độ lớn vi sinh vật từ mẫu sữa có mật độ 1 CFU/25ml, phần nghiên cứu này nhằm tìm ra một môi trường tăng sinh phù hợp nhất cho đồng thời các vi sinh vật chọn lọc. Môi trường tăng sinh phù hợp được lựa chọn sẽ là môi trường tăng sinh thu được mật độ vi sinh vật cao nhất sau 4
giờ tăng sinh từ mẫu thí nghiệm ban đầu đối với cả hai vi sinh vật. Môi trường này sẽ được lựa chọn để tăng sinh đồng thời cả hai vi sinh vật trong các thí nghiệm sau.
Từ kết quả trên, ta nhận thấy rằng sau 4 giờ tăng sinh thì mật độ vi sinh vật khi tăng sinh bằng sữa đối với cả hai vi sinh vật đều cao. Hay môi trường tăng sinh phù hợp nhất cho cả hai vi sinh vật là sữa tươi tiệt trùng. Như vậy, từ các thí nghiệm sau ta sẽ chọn sữa tiệt trùng làm môi trường tăng sinh cho cả hai vi sinh vật.