Cao các phân đoạn dịch chiết từ quả Phật thủ được hoà tan trong dung môi thích hợp để
chạy sắc kí. Sử dụng bản mỏng tráng sẵn Silicagel 6OF254. Sau khi tiến hành chạy sắc kí với nhiều hệ dung môi khác nhau chúng tôi nhận được hiệu quả tốt nhất với hệ dung môi TEAF (toluen - ethylacetate - acetone - acid Formic) = 5:3:1:1. sắc kí đồ của các phân đoạn dịch chiết từ quả Phật thủ cho nhiều màu sắc khác nhau khi nhuộm bằng dung dịch H2SO4 10% (hình 3.2), và màu sắc của các băng cũng có độ đậm nhạt khác nhau. Điều này chứng tỏ hàm lượng của các hợp chất tự nhiên trong các phân đoạn là khác nhau (hình 3.2).
r
'Ọuercetin (Rf = 0,54) Silymarin
Naringin (Rf=0,16) 5 6 7
Hình 3.2. Sắc kí đồ dịch chiết quả Phật thủ trên bản mỏng Silicagel (hiện màu bằng dung dich
H2SO4 10%), hệ đệm TEAF (5:3:1:1)
Mau cao Tỉ lệ % polyphenol trong phân đoạn cao khô
Cao EtOH 1,62%
Cao n- hex an 1,34%
Cao CHCI3 0,50%
Cao EtOAc 4,36%
Chứ thích:
1: Phân đoạn EtOH; 2: Phân đoạn n - hexan; 3: Phân đoạn CHC13; 4: Phân đoạn EtOAc; 5: Chất chuẩn Quercetin; 6: Chất chuẩn Silymarin; 7: Chất chuẩn Naringin
Kết quả phân chia sắc kí bằng kỹ thuật sắc kí lớp mỏng trên tấm silicagel cho thấy phân đoạn n-hexan và CHCI3 đều chứa các băng ở vị trí Quercetin và là nhiều băng vạch nhất (10 và 9 băng), phân đoạn EtOAc có 8 băng, phân đoạn EtOH ít nhất (4 băng). Bản sắc kí đồ lớp mỏng cũng cho thấy phân đoạn EtOAc chứa nhiều hợp chất Naringin (hàng 4). Đặc điểm của các băng vạch sắc kí đồ được trình bày rõ trong bảng 3.4.
Bảng 3.4. Đặc điểm sắc kí đồ các phân đoạn dịch chiết từ quả Phật thủ
Quan sát sắc kí đồ chúng ta thấy có nhiều băng vạch với nhiều màu sắc khác nhau, như màu tím, màu xanh, màu hồng, màu nâu và màu vàng (đặc trung của flavonoid) chứng tỏ trong quả Phật thủ chứa khá đầy đủ các loại hợp chat polyphenol. Đáng chú ý nhất trong phân đoạn CHCI3 và phân đoạn EtOAc đều có một vạch màu vàng (Rf = 0,54) giống với đặc điểm của flavonoid Quercetin có trong cột chất chuẩn, ngoài ra phân đoạn EtOAc còn có thêm một vạch màu nâu (Rf = 0,16) giống với đặc điểm của flavonoid Naringin có trong cột chất chuẩn nên rất có thể trong dịch chiết từ quả Phật thủ có Quercetin và Naringin - các flavonoid đã có nhiều nghiên cứu về đặc tính sinh dược học. Điều này hoàn toàn phù hợp với kết quả định tính ở trên và là cơ sở cho chúng tôi quyết định chọn các phân đoạn EtOH, n-hexan và EtOAc vào mô hình chuột thí nghiệm trong những nghiên cứu tiếp theo.