1. Mục đớch:
Là một trong những phương phỏp sử dụng để phõn tỏch cỏc đoạn DNA cú kớch thước khỏc nhau, xỏc định được sự cú mặt của DNA quan tõm.
2. Nguyờn tắc:
DNA tớch điện õm khụng đổi nhờ khung photphate vỡ thế dưới tỏc động của điện trường cỏc phõn tử DNA sẽ di chuyển từ cực õm sang cực dương và cỏc DNA khỏc nhau về kớch thước, khối lượng phõn tử, mức độ xoắn và đa dạng phõn tử(mạch thẳng hay mạch vũng) dần được tỏch nhau ra trờn trường điện di, cỏc đoạn DNA cú kớch thước càng nhỏ thỡ tốc độ di chuyển trờn trường điện di càng nhanh hơn. Sau khi điện di kết thỳc ta cú thể quan sỏt cỏc phõn tử DNA nhờ sử dụng thuốc nhuộm phỏt huỳnh quang như ethidium. Mỗi một băng điện di phản ỏnh một tập hợp phõn tử DNA cú cựng kớch thước.
3. Húa chất và vật liệu
- Mỏy chạy điện di agarose
- Gel agarose, dung dịch TAE x1 dựng để chạy điện di DNA - Đầu cụn, pipet,...
4. Cỏch tiến hành:
- Lấy 0,2-0,5g agarose vào 30ml dung dịch TAEx1(tỉ lệ: 6-7g agarose/1000ml TAE x1) vào bỡnh thủy tinh chịu nhiệt, lắc đều cho vào lũ vi súng 1-2 phỳt để agarose tan hết. Bổ sung thờm Ethylbromine tỉ lệ 1àl/10ml. Đổ dung dịch agarose này vào khay gel điện di cú cài sẵn lược thớch hợp để
tạo giếng tra DNA. Sau 30-60 phỳt gel đó đụng cứng gỡ ra và đặt vào bể điện di, đổ đệm TAE(x1) vào sao cho ngập mặt gel 1-2mm.
- Lấy 5àl DNA trộn đều với 1-2àl PBL, trộn nhẹ nhàng để khụng tạo bọt vỡ nếu tạo bọt khớ tra mẫu vào giếng trong gel mẫu sẽ bị bọt khớ đẩy hết ra ngoài. Sau đú tra mẫu vào giếng trong gel
- Chạy điện di với hiệu điện thế 110V, trong khoảng 25-30 phỳt
- Quan sỏt bản gel bằng mỏy soi gel được chiếu bằng tia UV, sau đú kết luận và chụp ảnh