độ 4ºC trong ASP có bổ sung Penicillin+Streptomycin với các liều lượng khác nhau
Hình 3.6: Hoạt lực (%) và vận tốc của tinh trùng (m/s) ở tỷ lệ pha loãng 1:3,
thang nhiệt độ 4ºC trong ASP bổ sung Penicillin+Streptomycin với các liều lượng khác nhau.
Control: Lô đối chứng.
Qua đồ thị ta thấy tinh trùng bảo quản có bổ sung Penicillin+Streptomycin ở liều lượng 200 ppm có hoạt lực và tốc độ tốt nhất lần lượt là 3,00%, 52,00m/s; kéo dài thời gian sống đến 30 ngày; thấp nhất ở liều lượng 600 ppm có hoạt lực 10,00% và vận tốc 60,00m/s; kéo dài thời gian sống chỉ có 24 ngày. Và ở lô đối chứng, tinh trùng chỉ tồn tại đến ngày thứ 18.
Sau 1 ngày bảo quản hoạt lực của tinh trùng trong ASP với tỷ lệ 1:3 ở các thang nhiệt độ trên không có sự sai khác. Đến ngày thứ 6 thì hoạt lực của tinh trong ASP với tỷ lệ 1:3 ở các liều lượng bổ sung Penicillin+Streptomycin khác nhau có sự sai khác hoàn toàn với nhau. Tuy nhiên, hoạt lực, vận tốc và thời gian sống của tinh trùng bảo quản ở liều lượng 200 ppm tốt nhất, kéo dài đến ngày thứ 30.
Qua phân tích hình 3.4, 3.5, 3.6 qua đây, việc bổ sung kháng sinh đối với tinh trùng không pha loãng hoặc pha loãng đều cải thiện được thời gian lưu trữ, việc bổ sung này cho thấy đây là yếu tố quan trọng trong lưu trữ lạnh tinh trùng. Chất kháng sinh rất cần thiết để kéo dài thời gian bảo quản tinh trùng.
Theo một số nghiên cứu khi sử dụng 600ppm gentamycin hoặc 200ppm neomycin cho thời gian bảo quản lên 26 ngày [61]. Việc lưu trữ tinh trùng cá thìa (Polyodon
spathula) khi bổ sung 5000IU/penicillin+5mg/ml streptomycin cho khả năng thụ tinh
73% sau 25 ngày bảo quản và có thể duy trì khả năng vận động đến ngày 56 [32].
Tóm lại, tinh trùng có hoạt lực tốt nhất nếu được bảo quản trong các điều kiện tối ưu: bảo quản trong chất bảo quản ASP ở tỷ lệ pha loãng 1:3 khi bổ sung kháng sinh Gentamycin với liều lượng 200 ppm, thấp nhất khi bổ sung penicillin + streptomycin với liều lượng 600 ppm.
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 4.1. Kết luận:
- Chất bảo quản tốt nhất cho tinh trùng cá mú cọp trong tủ lạnh là ASP (dịch tương nhân tạo), có hoạt lực 4,00%, và vận tốc đạt 33,00m/s. Tinh trùng có thể tồn tại đến ngày thứ 24.
- Tỉ lệ pha loãng tối ưu cho tinh trùng cá mú cọp trong tủ lạnh là 1:3 (tinh dịch: chất bảo quản), với hoạt lực 4,56%, vận tốc 12,33m/s. Tinh trùng tồn tại đến ngày thứ 21.
- Nhiệt độ thích hợp cho bảo quản lạnh tinh trùng cá mú cọp trong tủ lạnh là 4oC với hoạt lực 10,00% và vận tốc 54,00m/s. Tinh trùng tồn tại đến ngày thứ 24.
- Việc bổ sung kháng sinh trong bảo quản tinh trùng cá mú cọp trong tủ lạnh có thể kéo dài thời gian tồn tại của tinh trùng. Kết quả thu được từ nghiên cứu này như sau:
+ Tinh trùng bảo quản có bổ sung Neomycin ở liều lượng 200 ppm có hoạt lực và tốc độ tốt nhất với hoạt lực và tốc độ tốt nhất lần lượt là 4,00%, 56,00m/s, có thể kéo dài thời gian hoạt lực đến ngày thứ 36.
+ Tinh trùng bảo quản có bổ sung Gentamycin ở liều lượng 200 ppm có hoạt lực và vận tốc tốt nhất lần lượt là 9,00%, 63,00m/s; kéo dài thời gian sống đến 30 ngày.
+ Tinh trùng bảo quản có bổ sung Penicillin+Streptomycin ở liều lượng 200 ppm có hoạt lực và vận tốc tốt nhất lần lượt là 3,00%, 52,00m/s đến ngày thứ 30. 4.2. Đề xuất ý kiến:
- Các yếu tố chính ảnh hưởng đến quá trình bảo quản lạnh tinh trùng cá mú cọp gồm: chất bảo quản, tỷ lệ pha loãng, nhiệt độ và kháng sinh. Cần có những nghiên cứu bảo quản tinh trùng cá mú cọp trong các chất bảo quản khác để kéo dài thời gian bảo quản hơn.
- Trong thí nghiệm này, việc bảo quản tinh trùng trong điều kiện được cung cấp oxy chưa được thực hiện dẫn đến tỷ lệ sống và thời gian hoạt lực của tinh trùng giảm. Do đó, cần có nghiên cứu cụ thể hơn để kiểm tra ảnh hưởng của oxy đến tỷ lệ sống và thời gian bảo quản tinh trùng cá mú cọp.
- Tinh trùng cá mú cọp chỉ được bảo quản ở 0C, 2C, 4oC, vì vậy để có thể xác định được nhiệt độ nào là thích hợp nhất để bảo quản thì cần có nhiều thí nghiệm nghiên cứu bảo quản ở các nhiệt độ khác nhau để so sánh với kết quả của thí nghiệm trên.
- Qua thí nghiệm ta thấy, tỷ lệ sống, thời gian hoạt lực và chất lượng của tinh trùng cá mú cọp thay đổi theo thời gian bảo quản. Do đó, đối với các nghiên cứu sau này, nên tiến hành cho thụ tinh nhằm đánh giá được chất lượng tinh trùng một cách chính xác hơn.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt
1. Bộ, Đoàn Khắc (2008), "Kỹ thuật nuôi cá mú", Nhà xuất bản Đà Nẵng. 2. Cúc, Hồ Thu (1996), "Tổ chức học - Phôi sinh học", Tài liệu lưu hành nội bộ. 3. Diệp, Hồ Kim, Phạm Anh Tuần, Phạm Minh Anh, Trần Thúy Hà, Phạm
Văn Sao và Đặng Thị Tuyết Mai (2002), "Nghiên cứu bảo quản tinh cá",
Báo cáo tổng kết đề tài, Viện nghiên cứu 2. Nuôi trồng Thủy sản 1, Đình Bảng, Bắc Ninh.
4. Định, Trần Văn (2007), "Nghiên cứu bản quản tinh nang tôm sú Penaeus monodon (Fabricius, 1798) băng phương pháp đông khô tại Ninh Thuận",
Luận văn Thạc sĩ . Trường Đại học Nha Trang.
5. Dung, Lưu Thị và Phạm Quốc Hùng (2005), "Bài giảng mô phôi học thuỷ sản", NXB Nông nghiệp thành phố Hồ Chí Minh, tr. 47-49.
6. Hải, Trần Ngọc và Nguyễn Thanh Phương (2006), "Kỹ thuật sản xuất giống và nuôi cá biển", Bài giảng, Trường Đại Học Cần Thơ.
7. Lai, Bùi, Nguyễn Quốc Khang, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Quang Long và Mai Đình Yên (1985), "Cở sở sinh lý sinh thái cá", NXB Nông nghiệp, Hà Nội.
8. Long, Đàm Bá (2005), "Nghiên cứu bảo quản tinh trùng cá mè trắng (Hypopthalmichthys molitrix) trong Nitơ lỏng (-196oC)", Luận văn thạc sĩ. Trường Đại học Nha Trang.
9. Minh, Nguyễn Văn, Ngô Đăng Nghĩa và Đặng Thúy Bình (2010), " Nghiên cứu bảo quản tinh trùng tôm sú (Penaeus monodon) (Fabricius), 1798 trong nitơ lỏng", Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản. Trường Đại học Nha Trang. 10. Phụng, Nguyễn Hữu và Đỗ Thị Như Nhung (1995), "Danh mục cá biển Việt
Nam", Tập 3, Nhà xuất bản Khoa học kỹ thuật.
11. Thành, Nguyễn Minh, Trịnh Quốc Trọng, Hoàng Quang Bảo và Nguyễn Thị Hồng Vân (2001-2003), "Bảo quản tinh cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) dài hạn bằng nitơ lỏng", Viện nghiên cứu Nuôi trồng Thuỷ sản 2.
12. Thi, Nguyễn Nhật (1991), "Cá Biển Việt Nam. Cá Xương vịnh Bắc Bộ",
13. Toàn, Vũ Văn (2002), "Danh Mục Các Loài Nuôi Biển Và Nuôi Nước Lợ Việt Nam Hợp Phần Hỗ Trợ Nuôi Trồng Thủy Sản Biển Và Nước Lợ (SUMA), Danida", Bộ Thủy Sản, Hà Nội tr. 118.
14. Tuấn, Dương (1981), "Sinh lý học động vật và cá", Tài liệu lưu hành nội bộ, tr. 310-314.
15. Tuấn, Lê Anh (2004), "Tình hình nuôi cá mú ở Việt Nam: Hiện trạng và các trở ngại về mặt kỹ thuật", Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản, Trường ĐH Thủy sản Số đặc biệt, tr. 174 - 179.
16. Vũ, Nguyễn Thành, Tạ Khắc Thường và Phạm Thị Anh (2005- 2009), "Nghiên cứu thử nghiệm bảo quản tinh nang tôm he nhằm phục vụ cho sản xuất giống nhân tạo", Tuyển tập các công trình nghiên cứu khoa công nghệ. Viện nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản 3, tr. 805- 814.
17. Xuân, Lê, Nguyễn Hữu Tích và Nguyễn Đức Tuấn (2010), "Chuyển đổi giới tính, nuôi vỗ thành thục, sinh sản và ương nuôi thành công cá song vằn (Epinephelus fuscoguttatus)", Tạp chí khoa học và phát triển. Trường Đại Học Nông Nghiệp I tr. 472 - 480.
Tài liệu tiếng anh:
18. Alavi, S.M.H. và Cosson, J. (2006), "Sperm motility in fishes. (II) Effects of ions and osmolality: A review", Cell Biology International. 30, tr. 1-14. 19. Alavi, S.M.H., Rodina, M, Policar, T. , Kozak, P., Psenicka, M. và Linhart,
O. (2007), "Semen of Perca fluviatilis L.: Sperm volume and density, seminal plasma indices and effects of dilution ratio, ions and osmolality on sperm motility", Theriogenology. 68, tr. 276-283.
20. Barbato, F., Canes, S., Moretti, F. và Misiti, S. (1996), "Notes on a cryopreservation technique for gilthead seabream sperm.", Proceedings of the Commission C2, Refrigeration and Production, International Symposium Froid et Aquaculture, tr. 21.
21. Bates, M.C., Wayman, W.R. và Tiersch, T.R. (1996), "Effect of osmotic pressure on the activation and storage of channel catfish sperm", Trans. Am. Fish. Soc, tr. 798 - 802.
22. Baynes, S.M. và Scolt, A.P. (1987), "Cryoperservation of Rainbow Trout Spermatozoa", The Influence of Sperm Quality, Egg Quality and Extender Composition on Post- Thaw Fertility Aquaculture. 66, tr. 53-67.
23. Billard, R. (1978), "Changes in structure and fertilizing ability of marine and fresh water fish spermatozoa diluted in media of various salinities",
Aquaculture. 14, tr. 187-198.
24. Billard, R. (1992), "Reproduction in rainbow trout: sex differentiantion, dynamics of gametogenesis, biology and preservationof gametes
", Aquaculture. 100, tr. 263-298.
25. Billard, R. và Cosson, M.P. (1992), "Some problems related to the assessment of sperm motility in freshwater fish", J Exp Zool. 261, tr. 122- 314.
26. Billard, R., Cosson, J., Crim, L. W. và Suquet, M. (1995), "Sperm physi- ology and quality, in Broods-tock Management and Egg and Larval Quality, Bromage, N., Roberts R (eds)", Editor Blackwell, Oxford, tr. 25- 52.
27. Billard, R., Cosson, J., Perchec, G. và Linhart, O. (1995), "Biology of sperm and artificial reproduction in carp", Aquaculture. 129, tr. 95-112.
28. Billard, R.J. (1983), "Effects of ceolomic and seminal fluids and various saline diluents on the fertilizing ability of spermatozoa in the Rainbow trout, Salmo gairdneri", Reprod Fertil. 68, tr. 77-84.
29. Blaxter, J.H.S. (1953), "Sperm storage and cross-fertilization of spring and autumn spawning herring ", Nature. 172, tr. 1189-1190.
30. Bolla, S., Holmefjord, I. và Refstie, T. (1987), "Cryogenic preservation of Atlantic halibut sperm", Aquaculture. 65, tr. 371 - 374.
31. Bozkurt, Y., Ogretmen, F. và Secer, F.S. (2009), "Effect of Different Extenders and Storage Periods on Motility and Fertilization Success of Grass Carp (Ctenopharyngodon idella) Sperm During Spawning Season", Tarim Bilimleri Dergisi. 15, tr. 277-284.
32. Brown, G.G. và Mims, S.D. (1995), "Storage, transportation, and fertility of undiluted and diluted paddlefish milt", Prog Fish Cult. 57, tr. 64.
33. Buyukhtipoglu, M.S. và Holtz, W. (1978), "Preservation of trout sperm in liquid or frozen state", Aquaculture. 14, tr. 49 - 56.
34. Cabrita, E., Robles, V. và Herráez, P. (2009), "Sperm quality assessment, in Methods in Reproductive Aquaculture Marine and Freshwater Species",
Elsa Cabrita., Vanesa Robles. and Paz Herráez., Editors.: CRC Press Taylor & Francis Group, tr. 93-149.
35. Cabrita, E., Robles., Páramo, S.M., Cerezales, S.P., Anel, L. và Herráez, M.P. (2006), "Motility of cryopreserved seabream spermatozoa: effect of channel blockers", International Symposium on Spermatology, Madrid, Spain, tr. 17-22.
36. Chambeyro, F. và Zohar, Y. (1990), "A diluent for sperm cryopreservation of gilthead seabream, (Sparus aurata)", Aquaculture. 90, tr. 345 - 352.
37. Chao, N.H., Chen, H.P. và Liao, L.C. (1975), "Study on cryogenic preservation of grey mullet sperm", Aquaculture.
38. Chereguini, O., Cal, R.M., Dreanno, C., Ogier de Baulny, B., Suquet, M. và Maisse, G. (1997), "Short-term storage and cryopreservation of turbot (Scophthalmus maximus) sperm", Aquat Living Resour. 10, tr. 251.
39. Christensen, J.M. và Tiersch, T.R. (1996), "Refrigerated storage of channel catfish sperm", J World Aquacult Soc. 27, tr. 340.
40. Cosson, J., Groison, A.L., Suquet, M., Fauvel, M., Dreanno, C. và Billard, R. (2008), "Traits of sperm motility in marine fish: a review and new data",
Journal of Applied Ichthyology.
41. Cosson, J., Groison, L.A., Suquet, M, Fauvel, C., Dreanno, C. và Billard, R. (2008), "Marine fish spermatozoa: racing ephemeral swimmers.
", Reproduction September. 136, tr. 277-294.
42. DeGraaf, J.D. và Berlinsky, D.L. (2004), "Cryogenic and refrigerated storage of Atlantic cod (Gadus morhua) and haddock (Melanogrammus aeglefinus) spermatozoa", Aquaculture. 234, tr. 527.
43. DeGraaf, J.D. và Berlinsky, D.L. (2004), "Cryogenic and Refrigerated Storage of Rainbow Smelt (Osmerus mordax)spermatozoa", J World Aquacult Soc. 35, tr. 209.
44. Dreanno, C., Suquet, M., Quemener, L., Cosson, J., Fierville, F. và Normant, Y. (1997), "Cryopreservation of turbot (Scophthalmus maximus) spermatozoa", Theriogenology. 48, tr. 589 - 603.
45. Erdahl, A.W., Cloud, J.G. và Graham, E.F. (1987), "Fertility of rainbow trout (Salmo gairdneri) gametes: Gamete viability in artificial media",
Aquaculture. 60, tr. 323.
46. Erdahl, A.W., Erdahl, D.A. và Graham, E.F. (1984), "Some factors affecting the preservation of salmonid spermatozoa", Aquaculture. 43, tr. 341.
47. Gibbons, I.R. (1981), "Cilia and flagella of eukaryotes", Journal of Cell Biology. 91, tr. 107-124.
48. Gosh, R.I. (1985), "Energeticeskij obmen polovych kletok I embrionoy uryb Kiev", Naukova Dumka, tr. 147.
49. Graybill, J.R. và Horton, H.F. (1969), "Limited fertilization of steelhead trout eggs with cryopreservation sperm", Journal of the Fisheries Research Board of Canada. 26, tr. 1400 - 1404.
50. Gwo, J.C. (1993), "Cryopreservation of black grouper (Epinephelus malabaricus) spermatozoa", Theriogenolgy. 39, tr. 1331- 1342.
51. Harvey, B. (1983), "Cryopreservation of (Sarotherodon mossambicus) spermatozoa", Aquaculture. 32, tr. 20 - 313.
52. Hatipoglu, T. và Akcay, E. (2010), "Fertilizing ability of short-term preserved spermatozoa Abant trout (Salmo trutta abanticus)", Ankara Univ Vet Fek Derg. 57, tr. 33-38.
53. Horváth, A. và Urbanyi, B. (2000), "The effect of cryoprectants on the motility and fertilizing capacity of cryopreserved African catfish Clarias gariepinus (Burchell 1822) sperm", Aquac Res. 38.
54. Irawan, H., Vuthiphandchai, V. và Nimrat, S. (2010), "The effect of extenders, cryoprotectants and cryopreservation method on common carp (Cyprinus carpio) sperm", Animal Reproduction Science. 122, tr. 236-243. 55. Jenkins-Keeran, K. và Woods III, L.C. (2002), "An Evaluation of Extenders for
56. Kruger, J. C., De, W., Smith, G. L., Van Vuren, J. H. J. và Ferreira, J. T. (1984)), "Some chemical and physical characteristics of the semen of
Cyprinus carpio L. and Oreochromis mossamhicus ", Journal of Fish Biology. 24, tr. 263-272.
57. Lahnsteiner, F., Berger, B., Weismann, T. và Patzner, A.R. (1997), "Sperm structure and motility of the freshwater teleost Cottus gobio", Journal of Fish Biology. 50, tr. 564-574.
58. Lahnsteiner, F. và Patzner, R. (1998), "Sperm motility in the marine teleosts
Boops boops, Diplodus sargus, Mullus barbutus and Trachurus mediterraneus", Journal of Fish Biology. 52, tr. 726-742.
59. Le, M.H., Lim, H.K., Min, B., Park, M.S. và Chang, Y.J. (2011), "Storage of Yellow Croaker (Larimichthys polyactis) Semen", The Israeli Journal of Aquaculture- Bamidgeh.
60. Le, M.H., Lim, H.K., Min, B.H., Park, M.S. và Chang, Y.J. (2011), "Semen cryopreservation of Yellow Croaker (Larimichthyspolyactis)", Rev Fish Biol Fisheries. 21, tr. 789- 797.
61. Le, M.H., Lim, H.K., Min, B.H., Park, M.S., Son, M.H., Lee, J.U. và Chang, Y.J. (2011), "Effects of varying dilutions, pH, temperature and cations on spermatozoa motility in fish Larimichthys polyactis", Environmental Biology. 32, tr. 271-276.
62. Lee, S.C. (1993), "Fish of Taiwan", Lý Tín Triệt: Đài Loan Ngư loại tạp chí, tr. 277. 63. Legendre, M. và Billard, R. (1980), "Cryopreservation of Rainbow trout
sperm by deep freezing", Repr. Nutr. Develop. 20, tr. 68 - 185.
64. Legendre, M., Linhart, O. và Billard, R. (1996), "Spawning and managenment of gametes, fertilized eggs and embryos in Siluroidei, Aquat",
Res. 9, tr. 59-80.
65. Linhart, O., Cosson, J. và Mims, S.D. (2003), "Effects of ions on the motility of fresh and demembranated sperm of common carp (Cyprinus carpio) and paddlefish (Polyodon spathula)", Fish Physiol Biochem. 28, tr. 203-205. 66. Linhart, O., Mims, S.D. và Boris, G.B. (2003), "Ionic composition and
osmolality of paddlefish (Polyodon spathula, Acipense-riformes) seminal fluid", Aquacult Int. 11, tr. 357-368.
67. Linhart, O., Rodina, M. và Bastl, J. (2003), "Urinary blad-der, ionic composition of seminal fluid and urine with cha-racterization of sperm motility in tench (Tinca tinca )", J Appl Ichthyol. 19, tr. 177-181.
68. Linhart, O., Rodinaa, M. và Cosson, J. (2000), "Cryopreservation of Sperm in Common Carp (Cyprinus carpio) ", Sperm Motility and Hatching Success of Embryos Cryobiology. 41, tr. 241-250.
69. Linhart, O., Walford, J , Sivaloganathan, B. và Lam, T.J. (1999), "Effects of osmolality and ions on the motility of stripped and testicular sperm of freshwater- and seawater-acclimated tilapia (Oreochromis mossambicus)",
Journal of Fish Biology. 55, tr. 1344-1358.
70. Marques, S. và Godinho, H.P. (2004), "Short-term cold stroge of sperm from six