2.1.1. Mẫu vật
Mẫu phổi tươi của người bị ung thư phổi được cung cấp bởi Viện Quõn Y 103 (kớ hiệu H211 lấy ngày 25/1/2011).
2.1.2. Cỏc cặp mồi sử dụng
Hai cặp mồi NK1 F/ NK1 R1 và NK1 F1/ NK1 R được thiết kế dựa theo trỡnh tự cDNA hoàn chỉnh mó húa cho thụ thể neurokinin – 1 được cụng bố trờn ngõn hàng dữ liệu [57].
Cặp mồi NK1 F3/ NK1 R3 được thiết kế dựa vào trỡnh tự cDNA hoàn chỉnh tỏch dũng từ phổi người Việt Nam. Cỏc cặp mồi này được cung cấp bởi hóng IDT (Mỹ). Trỡnh tự cỏc mồi được trỡnh bày trong Bảng 6.
Bảng 6: Trỡnh tự cỏc mồi sử dụng trong nghiờn cứu
Tờn mồi Trỡnh tự (5’ – 3’) Mục đớch NK1 F CGAAATGGATAACGTCCTCCC Phõn lập cDNA mó húa cho thụ thể neurokinin – 1 NK1 R CAAGTCCCAGTGTGAGGGTG NK1 F1 GATCTACTTCCTCCCCCTGC NK1 R1 GCCAGCAGATGGCGAAGG
NK1 F3 ATTTAAGCTTACCATGGATAACGTCCTCC Chuyển gen mó húa cho neurokinin-1 từ vector tỏi
tổ hợp pJET1.2-NK1 sang vector biểu hiện NK1 R3 TAAGGATCCCTAGGAGAGCACATTG
pJET Forward CGACTCACTATAGGGAGAGCGGC Sàng lọc cỏc khuẩn lạc thu được pJET Reverse AAGAACATCGATTTTCCATGGCAG
2.1.3. Cỏc hệ thống vector
- Hệ thống vector biểu hiện ở tế bào động vật: pCDNA3, pEGFP-N1;
- Hệ thống vector tỏch dũng pJET 1.2 (Gene JETTM
PCR Cloning Kit (Fermentas);
Thụng tin về hệ thống vector biểu hiện được trỡnh bày ở Phụ lục.
2.1.4. Chủng vi khuẩn
- Chủng tế bào khả biến E. coli DH5α dựng cho việc duy trỡ cỏc vector tỏi tổ hợp.
2.1.5. Húa chất và thiết bị
a. Cỏc kit sử dụng: Cỏc kit được sử dụng trong nghiờn cứu và mục đớch sử dụng được trỡnh bày trong Bảng 7.
Bảng 7: Tờn và mục đớch sử dụng cỏc kit trong nghiờn cứu
Tờn kit Mục đớch
AccuPrepđ Viral RNA Extraction Kit (Bioneer) Tỏch RNA tổng số QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN) Tinh sạch sản phẩm cắt
High Pure PCR Product Purification Kit (Roche) Tinh sạch sản phẩm PCR
Gene JETTM PCR Cloning Kit (Fermentas) Tỏch dũng cDNA phõn lập được
b. Cỏc húa chất khỏc - dNTPs (Promega); - GoTaq Flexi(Promega); - Pfu polymerase (Fermentas);
- Cỏc enzyme giới hạn (Fermentas, New England Biolabs);
- Mụi trường nuụi cấy vi khuẩn Lubertani Broth (LB) gồm 1 % trypton, 0,5% cao nấm men, 0,5% NaCl;
- Cỏc húa chất thụng dụng khỏc đều đạt độ tinh khiết dựng trong nghiờn cứu sinh học phõn tử.
c. Thiết bị
Cỏc mỏy múc, thiết bị phục vụ cho nghiờn cứu thuộc Phũng thớ nghiệm Sinh Y - Khoa Sinh học; Phũng Genomic - Phũng thớ nghiệm Trọng điểm Cụng nghệ Enzym - Protein và Phũng Sinh học Phõn tử - Trung tõm nghiờn cứu Khoa học sự sống, Trường Đại học Khoa học Tự nhiờn, Đại học Quốc gia Hà Nội.
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});