- Nghiên cứu bảo quản Bộ sinh phẩm.
Thân v n=10 H v n=10
N ấm trong dạ dày được phát hiện bằng test PCR khuếch đại một đoạn AD 300 cặpbazotừ vùng ITS2 (hình 21) Theo kết quả phân tích, tỷ lệ nhiễm nấm dạ dày cao
Thân v n=10 H v n=10
Ct Ct VS1‐CG 31.49 VS1‐AG 32.08 VS2‐CG 31.92 VS2‐AG 36 VS3‐CG 32.7 VS3‐AG 34.82 VS4‐CG 32.2 VS4‐AG 30.63 VS5‐CG 31 VS5‐AG 29.03 VS6‐CG 32.82 VS6‐AG No Ct VS7‐CG 32.31 VS7‐AG 29.62 VS8‐CG 32.82 VS8‐AG 31.32 VS9‐CG 33.01 VS9‐AG 32.7 VS10‐CG 32.36 VS10‐AG 29.89
Bảng 16. Xác định nấm CK trong các bệnh nhân loét hành tá tràng. Tỷ lệ nhiễm nấm 29/52 (55,7%). HTT HTT sample ID n=52 Ct Sample ID n=52 Ct A155 No Ct A250 27.12 A156 No Ct A251 24.23 A160 No Ct A254 28.36 A164 No Ct A257 29.4 A167 No Ct A260 28 A178 No Ct A261 28.66 A181 No Ct A264 29.76 A182 No Ct A274 27.59 A188 No Ct A275 28.24 A197 No Ct A276 30.39 A202 No Ct A277 30.14 A205 No Ct A278 35.63 A207 No Ct A279 35.8 A210 No Ct A280 No Ct A211 No Ct A283 33.76 A215 No Ct A285 30.49 A217 No Ct A289 30.75 A220 37.52 A292 33.45 A225 No Ct A294 32.15 A226 No Ct A297 34.16 A229 No Ct A299 32.77 A230 No Ct A300 34.88 A231 26.25 A302 33.52 A235 No Ct A306 32.99
104 A236 No Ct A239 No Ct A241 27.67 A242 28.84 A250 27.12 A251 24.23 b. Xác định H. pylori trong 125 mẫu bệnh phẩm
Trong 53 mẫu bệnh phẩm của người bệnh chẩy máu dạ dày, chỉ có 46 mẫu nhiễm H. pylori (86.7%) với Ct cao đạt tới 22.03 (bảng 17), trong khi đó tỷ lệ % các bệnh nhân bị viêm dạ dày nhiễm H. pylori chỉ đạt 40%, Ct đạt giá trị 23 (bảng 18). Các bệnh nhân bị loét hành tá tràng nhiễm H. pylori với tỷ lệ 51.92 % có mật độ nấm cao hơn, Ct lên tới 24 (bảng 19).
Bảng 17. Xác định H. pylori trong thân và hạ vị dạ dày của các bệnh nhân viêm dạ
dày xuyết huyết. Tỷ lệ nhiễm H. pyloriở thân vị 22/27(81.4%), hạ vị 23/27 (85.1%).
Thân vị n=26 Hạ vị n=27 ID Ct ID Ct VS1‐CB 23.2 VS1‐AB 32.8 VS2‐CB No Ct VS2‐AB NoCt VS3‐CB 32.1 VS3‐AB 32 VS4‐CB 36.52 VS4‐AB 26.6 VS5‐CB 23.1 VS5‐AB 32.5 VS6‐CB 27.02 VS6‐AB 32.8 VS7‐CB 22.29 VS7‐AB 25.8 VS8‐CB 32.1 VS8‐AB 29 VS9‐CB 18.02 VS9‐AB 23.08 VS10‐CB No Ct VS10‐AB NoCt VS11‐CB 24.08 VS11‐AB 23.01 VS12‐CB 22.03 VS12‐AB 35.71 VS13‐CB No Ct VS13‐AB NoCt VS14‐CB 35.03 VS14‐AB 36.03 VS15‐CB 21.09 VS15‐AB 28.01 VS16‐CB No Ct VS16‐AB NoCt VS17‐CB 27 VS17‐AB 32.89 VS18‐CB 35 VS18‐AB 12.23 VS19‐CB 35.6 VS19‐AB 36.32 VS20‐CB 21 VS20‐AB 25 VS21‐CB 26.08 VS21‐AB 22.9 VS23‐CB 32.02 VS22‐AB 20.09
105 VS24‐CB 23.2 VS23‐AB 35.76 VS25‐CB 35.1 VS24‐AB 32.01 VS26‐CB 24 VS25‐AB 26,03 VS27‐CB 27.08 VS26‐AB 35.5 VS27‐AB 38.09
Bảng 18. Xác định H. pylori trong thân và hạ vị của các bệnh viêm dạ dày mãn. Tuy lệ nhiễm H. pyloriở thân vị 4/10 (40%) và hạ vị 4/10(40%).
Thân vị n=10 Hạ vị n=10 ID HP1125 ID HP1125 VS1‐CG NoCt VS1‐AG NoCt VS2‐CG Noct VS2‐AG NoCt VS3‐CG NocCt VS3‐AG NoCt VS4‐CG NoCT VS4‐AG NoCt VS5‐CG 24.8 VS5‐AG 28.2 VS6‐CG 33.15 VS6‐AG 23.1 VS7‐CG 35.9 VS7‐AG 32.9 VS8‐CG 36.07 VS8‐AG 28.09 VS9‐CG NoCt VS9‐AG NoCt VS10‐CG NoCt VS10‐AG NoCt
Bảng 19.Xác định H. pylori trong mẫu sinh thiết hạ vị dạ dày của các bệnh nhân bị
loét hành tá tràng. Tỷ lệ nhiễm H. pylori 18/52 (34.6%)
A155 NoCt A241 32.06
A156 NoCt A242 32.09
A160 NoCt A250 31.4
A164 NoCt A251 28.14
A167 NoCt A254 31.68
A178 NoCt A257 NoCt
A181 NoCt A260 31.73
A182 NoCt A261 NoCt
A188 NoCt A264 NoCt
A197 NoCt A274 NoCt
A202 NoCt A275 NoCt
A205 31.9 A276 NoCt
A207 NoCt A277 NoCt
A210 NoCt A278 NoCt
A211 NoCt A279 NoCt
A215 24.06 A280 NoCt
A217 NoCt A283 36.43
A220 NoCt A285 32.84 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
106
Phân tích hiệu quả của Bộ sinh phẩm phát hiện nhiễm vi sinh vật dạ dày
Bộ chế phẩm sinh học phát hiện nhiễm vi sinh vật dạ dày xác định H. pylori và
C. krusei thường gặp ở các bệnh nhân bị suy thoái hệ thống miễn dịch, HIV/AIDs . Bộ sinh phẩm có những ưu điểm như sau:
a.Phát hiện các loài gây bệnh không qua nuôi cấy b. Thời gian phân tích ngắn
c. Độ nhậy cao d. Độđặc thù cao
So với các phương pháp qPCR không sử dụng MB đang lưu hành, phương pháp sử dụng các đầu dò Beacon cho phép phát hiện ADN đich mang đột biến sai khác một gốc bazơ so với phiên bản dại.
e. Giá thành được có thể chấp nhận được
Theo tính toán, giá phản ứng PCR phát hiện các vi sinh vật gây nhiễm dạ dày không cao hơn một phản ứng PCR bình thường nhiều: viêc sử dụng mẫu dò làm tăng giá phân tích khoảng 50.000 VND/ phản ứng.
A226 NoCt A292 23.09
A229 26.08 A294 24.08
A230 35.39 A297 21.05
A231 30.43 A299 NoCt
A235 NoCt A300 NoCt
A236 24.08 A302 NoCt
107
KẾT LUẬN
Trong qua trình thực hiện Nhiệm vụ nghị định thư, các nhà khoa học hai nước Việt Nam và Hoa kỳđã phối hợp nghiên cứu tình trạng nhiễm H. pylori và các vi sinh vật non-HP trong các bệnh nhân bị viêm, loét và ung thư dạ dày cũng như chế tạo đầu dò Beacon để phát hiện hai loài gây bệnh đáng chú ý nhất gây nhiễm là H. pylori và
C. krusei bằng qPCR. Các phát hiện chủ yếu của Nhiệm vụ nghịđịnh thư bao gồm: * Xác định HPstatus của các bệnh nhân thuộc ở ba nhóm bệnh loét, viêm và ung thư dạ dày lần lượt là 92%, 87.7% và 73,3%. Các chủng vi khuẩn dạ dày
đa hình về mặt di truyền, đặc biệt các gen gây bệnh cagA và vacA.
* Xác nhận sự có mặt của các vi khuẩn non-HP trong 65,9% bệnh nhân nhiễm
H. pylori và định tên của 41 loài vi khuẩn non-HP phân lập. Một chủng vi khuẩn non-HP có gen 16S rARN hoàn toàn khác biệt với các loài vi khuẩn khác đã được phân lập.
* Các loài vi khuẩn non-HP thường là các loài gây bệnh cơ hội đã biết hoặc mới xuất hiện. Chúng có thể sống ởđiều kiện hiếu khí, vi khí hoặc kỵ khí, chịu được
acid và có tính chất khử Nitrate, Nitrite.
* Nấm Candida được phát hiện trong các bệnh nhân bị tổn thương dạ dày bị chẩy máu, viêm, loét hành tá tràng bằng phương pháp qPCR sử dụng đầu dò Beacon, chủ yếu là nấm C. krusei - một vi sinh vật gây bệnh cơ hội mới xuất hiện.Tỷ lệ % nhiễm nấm C. krusei ở các vùng trong dạ dày người bệnh giảm
từ tá tràng> hang vị> thân vị. Các bệnh nhân bị viêm dạ dày có tỷ lệ nhiễm nấm cao nhất, sau đó là các bệnh nhân loét tá tràng và cuối cùng là các bệnh nhân bị chẩy máu dạ dày.
* Đã nghiên cứu thiết kế hai mẫu dò MB để phát hiện H. pylori và C. krusei
bằng phương pháp qPCR và thử nghiệm trên 250 mẫu bệnh phẩm.
Nhiễm vi sinh vật dạ dày ở Việt Nam là hiện tượng được gặp từ nhiều năm trước đây do (i) vi khuẩn (ii) nấm nhưng không được sự chú ý nhiều của cộng đồng y học. Trong nghiên cứu này, 41 loài vi khuẩn non-HP đã được xác định trong bệnh phẩm dạ dày. Mặc dầu vậy, chỉ những loài vi khuẩn thuộc 4 chi Streptococcus, Ochrobactrum, Rothia and Bacillus mới nguy hiểm với con nguời. Ngoài ra, các bệnh nhân còn bị nhiễm nấm Candida chủ yếu do C. krusei với tỷ lệ cao hơn hẳn các nước trên thế giới. Trước đây, các bệnh nhân nhiễm nấm C. krusei chỉ tìm thấy ở những người bị HIV/AIDS hoặc ở những bệnh nhân có hệ thống miễn dịch suy giảm. Không rõ, vì sao hiện tượng đó xẩy ra ở người Việt Nam. Có thể, các bệnh nhân đã dùng kháng sinh có phổ rộng, có chế độ ăn uống quá mức về mặt chất lượng cũng như vệ
sinh. Thuốc fluconazole được các bệnh nhân sử dụng để diệt nấm có thể là nguyên nhân dẫn tới phát triển vượt trội của C. krusei trong dạ dày người là một khả năng. Các nghiên cứu về dịch tễ học cũng như các đặc điểm di truyền của C. krusei ở Việt Nam là cần thiết. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
108