- Lên men đường manitol - Đông huyết tương
Công thức tính :
C
N= >. xR_ (CEFU/ml, CEU/g) n.ƒ.v
Trong đó: » C tông số khuẩn lạc đếm được trên tất cả các đĩa
n: Số đĩa petri đã nuôi cây
f: Hệ số pha loãng của mẫu
v: thể tích mẫu cây vào mỗi đĩa petri.
R: Số ống thử phản ứng coagulase đương tính/ tông số ống thử
2.4. Xác định vi khuẩn kị khí sinh H›S ( chủ yếu là vi khuẩn kị khi:
2.4.1. Nguyên tắc:
Là phương pháp nuôi cây vi sinh vật kị khí trong môi trường thạch có chứa natri sunfÑt và phèn sắt, sau đó đếm số lượng.
2.4.2. Thiết bị, dụng cụ, hoá chất: - Ông nghiệm, cân.
- Pipet, bếp đun.
2.4.3.Môi trường, hoá chất:
Môi trường thạch Wilson Blair
Dung dịch Na;SOa
Dung dịch phèn sắt 5% ( FeSOu.7HạO)
2.4.4. Tiên hành:
Pha loãng mẫu: Tuỳ theo mức độ nhiễm bân của mẫu mà pha loãng dung dịch mẫu thành các độ pha loãng khác nhau. mẫu thành các độ pha loãng khác nhau.
Gieo cấy: Cho 1ml dung dịch mẫu vào ống chứa sẵn 2ml dung dịch natri suñt
20% và 5 giọt phèn sắt 5%. Sau đó đỗ thạch Wilson Blatr đã đun tan chảy và làm nguội đến 45- 50C vào khoảng 2/3 ống nghiệm. Cho một giọt parafin lỏng trên mặt thạch ống nghiệm đã cây mẫu.
Đun cách thuỷ ở 75°C trong 5 phút. Làm đông ngay bằng cách để vào tủ lạnh
hoặc ngâm vào nước lạnh. Để ở 37C trong 24 - 48h, nếu môi trường đục được
xem như là dương tính. Các khuẩn lạc Clostridium Welchi trên môi trường này có
màu đen, tròn đều.
2.4.5. Kết quả:
Tất cả các khuẩn lạc đen, to, nhỏ mọc trong ống nghiệm đều là vi khuẩn kị khí
sinh H;S. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2.5. Xác định tổng số vi khuẩn hiếu khí sinh H›S: 2.5.1. Nguyên tắc:
Là phương pháp nuôi cấy vi sinh vật hiểukhí trên môi trường pepton nới giấy chì axtêtat.
2.5.2. Thiết bị, dụng cụ, hoá chất: - Ông nghiệm, cân.
- Pipet, bếp đun. - Môi trường pepton. - Giấy chì axêtat.
2.5.3. Tiến hành:
e Pha loãng mẫu:
Tuỳ theo mức độ nhiễm bẩn của sữa mà pha loãng dung dịch 1:10, 1:100 e Gieo cấy:
- Dùng haiỗng nước pepton có thêm 2ml Na;SO; đặc: + 1 ống 10ml sữa chưa pha loãng.
+ 1 ống Iml sữa chưa pha loãng.
- Dùng hai ống nước pepton khác có thêm 2ml Na;SO; 25%: + lông cây 10ml mẫu pha loãng 1:10.
+ 1 ông cây Iml mẫu pha loãng 1:100.
Trên mỗi ống đều treo một giây chì axêtat. Chỉ axêtat có độc tính đối với vi khuẩn, vì vậy không nên để giâychạm vào dịch nuôi.
- Để ở 37C trong tủ ấm 48 - 72 giờ. Nếu có vi khuẩn hiếu khí sinh H;S thì giấy tâm chì axêtat có màu đen.
2.5.4. Kết quả: