cạnh trường cấy ria sang môi trườngEndo hoặc EMB đặt trong tủ ấm ở 37°C trong 24h. Nếu phát hiện thấy những khuẩn lạc đỏ ánh kim chúng ta cấy tiếp sang môi
trường thạch thường để thực hiện phản ứng IMVIC
Phản ứng IM VIC:
® Phản ứng sing Indol:
Dùng que cấy vòngchuyên dịchmẫu từ các ống nghiệm có chứa môi trường BC dương tính sang các ống nghiệm có chứa Trypton. Để các ống đã cấy vào tủ ấm ở
nhiệt độ 44°C trong 48h.
Thêm 0,5 ml thuốc thử indol vào các ống nghiệm có chứa Ttrypton đã nuôi cấy, lắc đều và sau 1 phút thì quan sát và ghi nhận số lượng các ỗng có màu đỏ.
e Phản ứng MR:
Cấy chuyên vi khuẩn nghỉ ngờ từ thạch thường vào môi trường Clark Lubs. Nuôi
ở tủ ấm 37C trong 48 — 96h. Sau đó hút 5ml môi trường đó cho vào một ống
nghiệm khác để dùng cho phản ứng VP. Môi trường Clark Lubs còn lại cho 5 giọt metyl đỏ 0,2% vào. Phản ứng dương khi môi trường có màu đỏ ngay sau khi cho thuốc thử vào.
e Phản ứng VP:
Phương pháp l : Cho 5ml dung dịch amonium sulfat đồng vào môi trường Clark Lubs ở phần trên. Quan sát phản ứng: phản ứng đương khi có màu đỏ xuất hiện trong vòng 15 —20 phút sau khi cho thuốc thử vào.
Phương pháp 2: Cho 3ml dung dịch napton 5% và Iml dung dịch KOH 40% vào môi trường Clark Lubs ở phần trên. Quan sát phản ứng: phản ứng đương khi có màu đỏ xuất hiện trong vòng 15 — 20 phút sau khi cho thuốc thử vào.
se Phản ứng citrafe:
Cấy chuyển vì khuẩn nghi ngờ từ thạch thường vào môi trường Simonos Cltrate. Nuôi ở tủ ấm 37°C trong 24h. Phản ứng dương khi môi trường đổi sang màu xanh dương.
2.2.5. Kết quả:
Dựa vào số khuẩn lạc nghi ngờ là E.Coli đã đếm được trên các đĩa, tỷ lệ số ống
nghiệm thử Indol dương tính ( có màu đỏ ) và tổng số ống thử Indol để tính kết
quả.
Số lượng E.Coli có trong 1g mẫu được tính theo công thức:
C r r
Tran nu R (CFU/ml, CFU/g )
Trong đó: S C: tổng số khuẩn lạc đếm được trên tất cả các đĩa
n:số đĩa đếm ở nông độ pha loãng thứ nạ : số đĩa đếm ở nồng độ pha loãng thứ2 f;: hệ số pha loãng của đĩa đếm th ứ l