Nghiên cứu từ tháng 1/2006 – 10/2009 gồm 102 bệnh nhân trong đó có 69 bệnh nhân hồi cứu, 33 bệnh nhân tiến cứu.
2.3.4.1. Nhóm hồi cứu
• Thông tin về hành chính, lâm sàng, đại thể đ−ợc đánh giá qua hồi cứu bệnh án và phiếu kết quả sinh thiết tại Bệnh viện Nhi trung −ơng.
• Đặc điểm tổn th−ơng vi thể đ−ợc đánh giá qua thu thập và phân tích tiêu bản, khối nến chứa bệnh phẩm. Cắt nhuộm lại, nhuộm đặc biệt hoặc nhuộm hoá mô miễn dịch đối với các tr−ờng hợp khó cần chẩn đoán phân biệt.
2.3.4.2. Nhóm tiến cứu
Nghiên cứu từ tháng 11/2008 – tháng 10/2009 gồm 33 bệnh nhân.
• Khai thác thông tin
- Ghi nhận thông tin về hành chính gồm họ tên, tuổi, giới, thời gian biểu hiện bệnh qua bệnh án và qua tiếp xúc trực tiếp với bệnh nhân.
- Xác định vị trí u qua bệnh án và biên bản phẫu thuật, ghi nhận thông tin về kích th−ớc u qua CT, MRI
• Đại thể
- Đo và ghi nhận kích th−ớc bệnh phẩm, đơn vị cm.
- U có vỏ bọc hay không, ranh giới và đặc điểm của mô quanh u.
- Tính chất xâm lấn: ranh giới với mô lành rõ không, có xâm lấn vỏ và mô lành không.
- Mật độ u: chắc, mềm hay hỗn hợp chỗ chắc chỗ mềm.
- Màu sắc: 1. Sẫm màu (đỏ, tím, đen); 2. Trắng/vàng; 3. Hỗn hợp (chỗ sẫm màu, chỗ sáng màu).
- Có ổ chảy máu hoại tử hay không, ổ chảy máu lan toả hay thành nốt. - Có ổ canxi hoá hay không.
- Ghi nhận và đánh giá đặc điểm tổ chức di căn (nếu có).
• Vi thể
- Mỗi khối u lấy ít nhất 5 mảnh bệnh phẩm: 2 mảnh vùng vỏ, 1 mảnh vùng trung tâm, 2 mảnh tại các vùng đa dạng tổn th−ơng nhất. Phần u còn lại đ−ợc l−u giữ
trong formol 10% đề phòng khi cần lấy mẫu thêm.
- Mảnh sinh thiết đ−ợc cắt với kích th−ớc 2,5 x 2 cm, dày 3-4 milimet, cố định trong dung dịch formol 10%, chuyển đúc và nhuộm H-E theo quy trình th−ờng quy, đọc d−ới kính hiển vi quang học có độ phóng đại tối đa 400 lần.
• Kỹ thuật hoá mô miễn dịch
- Những tr−ờng hợp khó (u NBTK không biệt hoá) cần chẩn đoán phân biệt đ−ợc nhuộm thêm hoá mô miễn dịch với ít nhất 2 dấu ấn kháng nguyên thần kinh (Neurofilament, NSE, Synaptophysin, Chromogranin) và các kháng nguyên loại trừ u tế bào tròn nhỏ khác (CD99, Desmin, WT1, LCA).
- Sử dụng kỹ thuật ABC (Avidin-Biotin Complex) thực hiện tại khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Nhi trung −ơng. Quy trình nh− sau:
1. Mảnh sinh thiết (3 – 4 àm) đ−ợc gắn trên tiêu bản dính superfrost, làm khô tự nhiên, để tủ ấm 37º qua đêm
2. Loại nến bằng Toluen và cồn theo quy trình th−ờng quy, rửa – ngâm trong n−ớc 5 phút
3. Bộc lộ KN trong dung dịch 0,01 M citric acid, sôi trong lò vi sóng 12 phút. Để nguội tự nhiên 30 phút. Rủa trong TBS pH 7,4 5 phút/1 lần x 3 lần
4. Khử KN nội sinh bằng dung dịch H2O2 3%/TBS x 10 phút, rửa trong TBS pH 7,4 5 phút/1 lần x 3 lần
5. Phủ KT 1 trong 30 phút
6. Rửa trong TBS pH 7,4 5 phút/1 lần x 3 lần 7. ủ với phức hợp KT 2: Dako envision 30 phút 8. Rửa trong TBS pH 7,4 5 phút/1 lần x 3 lần 9. Gắn màu DAB ~ 5 phút, rửa n−ớc chảy 10 phút