L ỜI CẢM ƠN
2.2.4/Xử lý mẫu tuyến sinh dục và quan sát tổ chức mô phôi học
Bao gồm các bước sau đây.
- Cố định mẫu tuyến sinh dục: bằng chất định hình Bouin có công thức như sau: + 750 ml dung dịch acid picric bão hoà.
+ 250 ml formalin 40 %.
+ 50 ml acid axetic đậm đặc.
+ Định hình mẫu trong 24h sau đó ngâm trong nước từ 1 -3h.
- Khử nước ở mẫu cố định: Lần lượt đưa mẫu qua cồn Etluylic với các nồng
độ khác nhau tăng dần.
+ Cồn 70% : 1 lần từ 30 - 60 phút. + Cồn 95% : 3 lần mỗi lần 30 - 60 phút. + Cồn 100% : 3 lần, mỗi lần 30 - 60 phút.
- Làm trong mẫu: Mẫu đã khử nước và được làm trong bằng xylen. + Xylen lần I : 30 phút.
+ Xylen lần II : 30 phút.
- Thấm Parafin: mẫu đã được làm trong chuyển vào Parafin đun nóng ở nhiệt
độ từ 56 - 580C, trong 4h. - Đúc Parafin:
+ Sử dụng máy để đổ Parafin đã nóng chảy vào khuôn đã có mẫu, sau
đó đặt khuôn lên dàn lạnh cho Parafin đông lại tạo ra khối Parafin chứa mẫu. Nên giữ mẫu chung ở một mặt khuôn để khi cắt được thuận tiện.
+ Cắt gọt khối Parafin chứa mẫu: Dùng dao mỏng cắt gọt bỏ những phần Parafin thừa và mặt của khối mẫu sâu vào 3 - 5µm.
- Cắt lát mẫu.
+ Gắn khối Parafin chứa mẫu vào máy Microtom. + Tiến hành cắt lát độ dày của lát cắt từ 5 - 7 µm.
+ Đưa lát cắt vào nước ấm ( 40 - 500C ) khoảng 1 - 2 phút để lát cắt giãn, không bị nhăn.
+ Dùng slide (lam) để lấy lát cắt ra khỏi nước có miết qua albumin.
+ Đặt lên máy sấy slide ở nhiệt độ 40 – 600C trong thời gian 1 – 4h. - Nhuộm Hematocylin và Eosin.
+ Loại bỏ Parafin ở lát cắt bằng Xilen I: 5 phút, Xylen II: 5 phút. + Làm no mẫu nước: • Cồn 100% lần I : 2 - 3 phút • Cồn 100% lần II : 2 - 3 phút • Cồn 95% lần I : 2-3 phút • Cồn 95% lần II : 2 - 3 phút • Cồn 80% lần I : 2 - 3 phút • Cồn 80% lần II : 2-3 phút • Cồn 50% : 2 - 3 phút
+ Nhúng mẫu trong nước ngọt 3 - 6 lần. + Nhuộm Hematocylin - Mayer: 4 - 6 phút. + Rửa qua nước chảy nhẹ : 4 - 6 phút. + Nhuộm Eosin : 2 - 3 phút
+ Làm mất nước trong mẫu:
• Cồn 95% I: 10 lần nhúng • Cồn 95% II: 10 lần nhúng • Cồn 100% I: 10 lần nhúng • Cồn 100% II: 10 lần nhúng
+ Làm trong mẫu: Xilen I: 2 - 3 phút; Xilen II: 2 - 3 phút
+ Dùng lamen sạch dán lên lam mẫu bằng keo bomcanada để bảo quản và quan sát mẫu dưới kính hiển vi.