Nguyên liệu: Rễ mật nhân khô mua ở nơi đảm bảo uy tín, có nguồn gốc rõ ràng. Trên 15 năm tuổi để đảm bảo chất lượng dịch chiết. Bảo quản nơi khô ráo, thoáng mát.
Xử lí: Rễ mật nhân được bỏ vỏ, cắt lát nhỏ để thuận tiện cho công đoạn nghiền phía dưới.
Nghiền nhỏ: Rễ mật nhân khô sau khi được xử lí được nghiền nhỏ bằng máy
nghiền cắt.
Qúa trình nghiền nhỏ nguyên liệu nhằm mục đích phá vỡ màng tế bào, tạo điều kiện cho dung môi dễ thấm ướt vào nguyên liệu, chất tan dễ khuếch tán vào dung môi. Từ đó giúp cho quá trình chiết diễn ra nhanh và triệt để hơn.
Chiết: Mật nhân đã nghiền nhỏ được cho vào các lọ thủy tinh có nắp đậy kín tránh hiện tượng dung môi bay hơi trong quá trình ngâm chiết. Ta tiến hành chiết trong điều kiện: dung môi chiết là Ethanol 80% (tỉ lệ nước/ethanol: 2/8), tỉ lệ nguyên liệu/dung môi: 1/10, thời gian chiết là 15 phút và nhiệt độ chiết là 500C.
Tiến hành chiết siêu âm trong máy siêu âm.
Lọc: Lọc nhằm mục đích loại bỏ các hợp chất không tan ra khỏi hỗn hợp chiết và thu hồi dịch chiết. Tiến hành lọc ở điều kiện phòng và sử dụng giấy lọc Whatman 01.
Sau khi lọc thu được dịch chiết lần 1, ta thu hồi bã và tiến hành chiết lần 2, lần 3 ở các điều kiện chiết tương tự ở lần 1. Sở dĩ ta lựa chọn 3 lần chiết là vì rễ mật nhân nguyên liệu là rễ mật nhân khô ( độ ẩm là 10,196 ± 0,043), hàm lượng ẩm ảnh hưởng đến khả năng hòa tan của nguyên liệu. Cụ thể với hàm lượng ẩm thấp, khả năng hòa tan của NL/DM sẽ thấp, do đó ta thu được dịch chiết không triệt để. Và như đã trình bày ở trên, thời gian kéo dài dịch chiết sẽ lẫn nhiều tạp chất và bay hơi gây hao phí. Hơn nữa, dựa vào kết quả ở hình 3.1, 3.2, 3.3 và 3.4 hoạt tính chống ôxy hóa ở lần 1, lần 2 là cao và lần 3 vẫn còn khá tốt. Do đó, ta lựa chọn chiết 3 lần để tránh hao phí nguyên liệu.
Dịch chiết: Sau khi lọc thu được dịch chiết lần 1, lần 2 và lần 3 từ rễ mật nhân. Ta tiến hành cô quay đuổi dung môi thu hồi dịch chiết nguyên chất, bảo quản lạnh để dùng cho các thí nghiệm sau.
