3. NUÔI CẤY TÉ BÀO TRÊN MÔI TRƯỜNG LỎNG
3.3. Ảnh hưởng của nồng độ BA và kỉnetin kết hợp vói IBA lên sự tăng trưởng sinh khối và sản phẩm ginsenosides
trưởng sinh khối và sản phẩm ginsenosides
Trong quá trình nuôi cấy mô, tế bào thực vật, các chất điều hòa sinh trưởng có tác dụng điều chỉnh sự phát sinh chồi bất định, quan trọng nhất là sự có mặt của cytokinin. Các cytokinin này sẽ hoạt hóa sự phân chia tế bào bằng cách kích thích mạnh mẽ sự tổng họp acid nucleic, protein và các chất cần thiết cho sự phân chia tế bào với điều kiện có auxin. Sau sự phân chia là giai đoạn giãn tế bào, giúp tế bào tăng kích thước và giúp các cơ quan phát triển. Ở giai đoạn này auxin lại đóng vai trò quan trọng kích sự dãn tế bào theo chiều ngang. Hàm lượng cytokinin cao sẽ hoạt hóa sự hình thành chồi bất định (Vũ Văn Vụ, 1999).
Chính vì vậy, trong thí nghiệm này sau khi đã xác định được nồng độ 3mg/L IBA (thí nghiệm 3.2) tối ưu cho sự sinh trưởng của tế bào, chúng tôi đã tiến hành thí nghiệm phối hợp giữa IBA với cytokinin (BA, kinetin) với nồng độ từ 0.1 đến 1.0 mg/L. Kết quả thu được ở (Bảng 7) cho thấy với nồng độ trên đã không ảnh hưởng đến sự sinh trưởng tế bào (tạo sinh khối), nhưng nồng độ cytokinin ảnh hưởng đáng kể đến sự tích lũy và tổng hợp ginsenoside. Sản phẩm ginsenoside thu được tăng khi tăng nồng độ cytokinin từ 0.1 - 0.5, tiếp tục tăng nồng độ lên 1.0 mg/L đã ức chế sự tổng hợp và tích lũy hàm lượng ginsenoside. Sản phẩm ginsenoside thu được (5.87 mg/g TL khô) ở nồng độ kinetin 0.5 mg/L và 5.95 mg/g TL khô ở nồng độ 0.5 mg/L BA.
Cytokinin được xác định là một yếu tố ảnh hưởng đến quá trình tổng hợp sản phẩm trao đổi chất thứ cấp. Trong nuôi cấy lỏng tế bào Panax
notoginseng, Zhong (1998) tìm thấy nồng độ kinetin cao đã ức chế quá trình
sinh trưởng tế bào và sự tổng hợp, tích lũy thành phần saponin. Các nghiên cứu nuôi cấy tế bào thực vật khác, nhiều tác giả đã thu được kết quả tương tự (Zhong và Yoshida, 1995; Sato và Cộng sự, 1996; Ilieva và Pavlov,
1997; Weselake và Cộng sự, 1998).
Bảng 7. Ảnh hưởng của nồng độ BA, kinetin kết hợp IBA lên sự tăng trưởng sinh khối và sản phẩm ginsenosides
Cytokỉnỉn Nồng độ (mg/L) TL tươi (g/L) TL khô (g/L) Sản phẩm ginsenoside (mg/g TL khô) Rg Rb Tổng 0 122 bz 9.8b 1.28 2.78 4.06 0.1 150a 10-lab 1.86 2.69 4.55 BA 0.5 149a 10.6 a 2.15 3.80 5.95 1.0 155 a 10.7a 2.05 3.27 5.32 0.1 145a 10.3a 1.67 3.21 4.88
Kinetin 0.5 156a 10.7a 2.26 3.61 5.87
1.0 146a 10.5a 2.05 3.12 5.17