3. NUÔI CẤY TÉ BÀO TRÊN MÔI TRƯỜNG LỎNG
3.2. Ảnh hưởng của nồng độ NAA và IBA lên sự tăng trưởng sinh khối và sản phẩm ginsenosides
và sản phẩm ginsenosides
Vai trò của auxin chủ yếu được sử dụng để kích thích sự phân chia tế bào. 2,4D là một auxin mạnh, không bị ôxy hóa bởi ánh sáng, không bị phân hủy bởi vi sinh vật, nhưng nó là một chất khá độc đối với sức khỏe con người. Do vậy 2,4D chỉ dùng trong các thí nghiệm để tạo mô sẹo. Còn để thương mại hóa sản phẩm người ta thường dùng các loại auxin khác. Trong thí nghiệm này chúng tôi chọn IBA, NAA cho các thí nghiệm tiếp theo.
Bảng 6. Ảnh hưởng của nồng độ auxin lên sự tăng trưởng sinh khối và sản phẩm ginsenosides Auxin Nồng độ (mg/L) TL tươi (g/L) TL khô (g/L) Sản phẩm gỉnsenoside (mg/g TL khô) Rg Rb Tổng 0 95cz 6.6c 1.66 2.42 4.02 1 134ab 9.5ab 1.78 2.67 4.45 2 148a 10.3a 1.80 3.15 4.95
IBA 3 156a 10.7a 2.10 3.35 5.45
4 131 ab 9.5ab 2.05 3.45 5.50
5 l l l b 7.9b 1.92 2.47 4.39
1 112bc 7.9b 1.23 2.75 3.98
2 124b 9.3b 1.54 3.01 4.55
NAA 3 132ab 9.5ab 1.79 3.08 4.87
4 144a 10.2a 1.80 3.41 5.21
5 105cb 7.4bc 1.92 3.19 5.11
'Không khác biệt hoặc khác biệt ờ mức p < 0.05 xử lí DUNCAN hai yếu tố.
Thí nghiệm được nuôi cây trên môi trường MS có bô sung 30 g/1 đường sucrose kết hợp với auxin IB A, NAA (nồng độ 1, 2, 3, 4 và 5 mg/1). Kết quả thu được ở Bảng 6 cho thấy:
Với mẫu nghiệm thức của IBA cho thấy sinh khối tế bào tăng đáng kể khi tăng nồng độ IBA từ 1 - 3 mg/L, tiếp tục tăng lên đến 5 mg/L thì ức chế sự sinh trưởng của tế bào. Sinh khối khô thu được là 10.7 g/L ở nồng độ 3mg/L IBA.
Hàm lượng Ginsenoside cũng được nghiên cứu, kết quả cho thấy ở nồng độ auxin thấp đã không ảnh đến sự tổng hợp và tích lũy sản phẩm trao đổi chất thứ cấp, tiếp tục tăng nồng độ IBA lên đến 5 mg/L IBA sẽ ức chế sự tổng hợp và tích lũy Ginsenoside. Sản phẩm Ginsenoside thu được là 5.45 mg/g TL khô ở nồng độ 3 mg/L IBA. Trong khi đó NAA nhìn chung ảnh hưởng không có ý nghĩa đến sự tổng hợp và tích lũy sản phẩm ginsenoside từ nồng độ 1 - 5 mg/L.
Mặt khác nếu so sánh hai loại auxin IBA và NAA, sinh khối thu được ở các nghiệm thức IBA lớn hơn so với NAA nếu so sánh cùng nồng độ. Xét về mặt kinh tế chúng tôi sử dựng IBA cho các thí nghiệm tiếp theo.
Chất điều hòa sinh trưởng thực vật được xem như một nhân tố quyết định sự thành công của nuôi cấy mô, tế bào thực vật, ảnh hưởng đến sự tăng trưởng sinh khối và sản phẩm trao đổi chất thứ cấp. Trong nuôi cấy tể bào hoa Hướng dương cho thấy, nồng độ auxin cao là thích hợp cho sự sinh trưởng tế bào, trong khi đó nồng độ cytokinin ảnh hưởng đến sự sinh tổng họp các sắc tố vàng và đỏ (Hanagata và Cộng sự, 1994). Son và Cộng sự, (1994) đã tìm thấy nồng độ 4 mg/L IBA là thích hợp cho sự sinh trưởng và phát triển sinh khối khi nuôi cấy rễ bất định Nhân sâm rừng (Panax ginseng). Như vậy, trong nuôi cấy in vitro của tế bào, mô thực vật các loài khác nhau cần chất điều hòa sinh trưởng khác nhau. Trong thí nghiệm này, IBA (3 mg/L) đã xác định là auxin thích hợp cho sự sinh trưởng tế bào và tổng hợp sản phẩm ginsenoside. Như vậy, IBA được sử dụng cho các thí nghiệm tiếp theo.
