- Kỹ thuật ELISA Sandwich
3.5Kiểm tra khả năng phát hiện kháng thể kháng HIV trong huyết thanh bệnh nhân của p24 tái tổ hợp
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tách dịng gen p24 của H
3.5Kiểm tra khả năng phát hiện kháng thể kháng HIV trong huyết thanh bệnh nhân của p24 tái tổ hợp
thanh bệnh nhân của p24 tái tổ hợp
Mục đích cuối cùng của việc biểu hiện p24 tái tổ hợp là sử dụng kháng nguyên này để phát hiện kháng thể kháng lại chính nĩ trong huyết thanh bệnh nhân HIV. Protein p24 tái tổ hợp sau khi tinh chế được ứng dụng để phát hiện kháng thể trong huyết thanh bệnh nhân. Tiến hành thử nghiệm trên 30 mẫu huyết thanh của bệnh nhân nhiễm HIV thuộc hai phân type B và CRF01_AE bằng kỹ thuật Western blot. Mặt khác để kiểm tra khả năng phản ứng chéo giữa hai phân type, chúng tơi cho kháng nguyên p24 tái tổ hợp phân type CRF01_AE phản ứng với ba loại kháng thể: kháng thể của bệnh nhân nhiễm HIV thuộc phân type AE, kháng thể của bệnh nhân nhiễm phân type B và kháng thể âm tính với HIV. Kết quả cho thấy mức độ phản ứng của protein tái tổ hợp với các mẫu huyết thanh cĩ sự khác biệt rất rõ ràng (hình3.14).
Hình 3.14: Kết quả kiểm tra phản ứng của protein p24 tái tổ hợp với kháng thể trong huyết thanh bệnh nhân bằng kỹ thuật western blot
Đường chạy 1, 23: Marker protein
Đường chạy 2, 3, 6, 8, 14, 16, 18, 21, 22: Phản ứng giữa kháng nguyên p24 với huyết thanh bệnh nhân nhiễm HIV thuộc phân type CRF01_AE Đường chạy: 9, 15, 17: Phản ứng giữa kháng nguyên p24 với huyết thanh bệnh nhân nhiễm HIV thuộc phân type B;Đường chạy 5: Phản ứng giữa kháng nguyên Thioredoxin với với huyết thanh bệnh nhân nhiễm HIV thuộc phân type CRF01_ AE; Đương chạy 4, 7,10, 11, 12, 13, 19, 20: huyết thanh âm tính với HIV.
kDa 72 - 55 - 43 - 34 - 26 - 17 - 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Phản ứng trên màng PVDF cho thấy tất cả những mẫu huyết thanh của bệnh nhân nhiễm HIV thuộc phân type CRF01_AE phản ứng rất đặc hiệu với kháng nguyên p24 tái tổ hợp, thể hiện những băng đậm. Những mẫu huyết thanh của bệnh nhân nhiễm HIV thuộc phân type B cũng phản ứng với kháng nguyên tái tổ hợp p24 nhưng mức độ phản ứng kém hơn, cụ thể là xuất hiện những băng mờ hơn nhiều so với phản ứng giữa kháng nguyên và kháng thể cùng thuộc phân type CRF01_AE. Những mẫu huyết thanh âm tính với HIV, hồn tồn khơng xảy ra phản ứng giữa kháng nguyên và kháng thể.
Trong 23 mẫu huyết thanh của bệnh nhân nhiễm HIV, bằng cách sử dụng kháng nguyên p24 tái tổ hợp để phát hiện kháng thể kháng p24 chúng tơi nhận thấy qua phản ứng Western blot, cĩ 12 mẫu cho kết quả dương tính và 2 mẫu cho kết quả âm tính mặc dù trước đĩ đã được xác định dương tính với HIV. 2 mẫu cho kết quả âm tính cĩ thể cĩ rất nhiều nguyên nhân, trong đĩ việc khơng cĩ kháng thể kháng p24 là khả năng cĩ thể xảy ra. Kháng thể kháng p24 xuất hiện đầu tiên, nĩ tiếp tục tồn tại trong huyết thanh sau đĩ kháng thể kháng những protein vỏ khác như gp120 và gp41mới bắt đầu xuất hiện. Sau vài tháng hoặc vài năm, kháng thể p24 mất đi là báo hiệu giai đoạn triệu chứng của bệnh. Vì vậy 2 mẫu cho kết quả âm tính cĩ thể do bệnh nhân nhiễm HIV đã nhiễm bệnh ở giai đoạn triệu chứng, kháng thể kháng p24 khơng cịn tồn tại.
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn