Đây là phương pháp cho phép khuếch đại và xác định số lượng các chuỗi DNA được tạo ra trong từng chu kỳ nhiệt. Sau mỗi chu kỳ nhiệt, số lượng các bản sao DNA được tổng hợp tăng lên sẽ cho các tín hiệu phát quang tăng tỷ lệ thuận. Dựa vào một gam mẫu chuẩn cĩ số lượng DNA đích xác định tiến hành đồng thời cùng mẫu thử để xây dựng một đường chuẩn dựa trên số liệu bản sao DNA đích và giá trị Ct của từng mẫu tương ứng (Ct là thời điểm ở chu kỳ n của PCR cho tín hiệu huỳnh quang tăng vọt so với tín hiệu nền). Nếu số lượng DNA bản đích càng lớn thì Ct càng nhỏ. Cĩ nhiều phương pháp sử dụng phép phát quang để xác định số lượng bản sao DNA được nhân lên. Thơng thường người ta thường dùng: SYBR Green 1 hoặc mẫu dị đặc hiệu.
1.5.4 Phát hiện gián tiếp sự cĩ mặt của HIV
Các kỹ thuật phát hiện gián tiếp sự cĩ mặt của HIV thơng qua các thành phần đặc hiệu kháng lại các thành phần cấu trúc của virus [13].
+ Kỹ thuật ngƣng kết (agglutination)
Kỹ thuật này dựa trên nguyên lý ngưng kết thụ động, những hạt như gelatin (SERODIA test), latex hoặc hồng cầu người làm giá đỡ cho các protein virus. Khi
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
cho tiếp xúc với KT kháng HIV, các hạt này tạo thành một mạng lưới ngưng kết cĩ thể nhận định bằng mắt thường.
Đây là kỹ thuật đơn giản, nhanh, khơng địi hỏi trang bị hiện đại và cĩ thể dùng để tiến hành sàng lọc hàng loạt. Tuy nhiên phương pháp này cĩ độ đặc hiệu thấp so với các phương pháp chẩn đốn khác và cĩ thể cho phản ứng dương tính giả.
+ Kỹ thuật miễn dịch ELISA
ELISA là phương pháp cho phép phát hiện hầu hết các mẫu xét nghiệm cĩ KT kháng HIV. Tuy nhiên, đây là phương pháp cĩ độ nhạy cao, do đĩ cĩ thể cho những kết quả dương tính giả. Để hạn chế nguy cơ này, cần phải cĩ phương pháp kết hợp để khẳng định chẩn đốn của ELISA. Western blot là phương pháp hỗ trợ phổ biến nhất để khẳng định kết quả dương tính của ELISA, IFA cũng được dùng như một phương pháp thay thế/bổ sung cho WB.
ELISA được ứng dụng để phát hiện các KT IgG anti-HIV, IgA anti-HIV hoặc IgM anti-HIV bằng 3 kỹ thuật sau: