- Kỹ thuật ELISA Sandwich
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tách dịng gen p24 của H
3.4 Tinh sạch protein tái tổ hợp
Để cĩ thể sử dụng protein tái tổ hợp phục vụ cho mục đích nghiên cứu tiếp theo, chúng tơi tiến hành tinh sạch protein tái tổ hợp này. Do protein tái tổ hợp cĩ 6 histidine nên cĩ ái lực cao với ion Ni2+
trên cột Probond Nickel-Chelating resin (Invitrogen). Trong quá trình tinh chế, imidazole được sử dụng như chất cạnh tranh
kDa 36kDa 35 45 66,2 116
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Ni2+ trong phức hợp Ni2+-histidine của protein tái tổ hợp. Nhiều protein của chủng chủ cĩ mang histidine nên cũng cĩ ái lực với Ni2+
trên cột. Tuy nhiên, lực liên kết giữa protein đĩ với Ni2+
yếu hơn nhiều so với protein tái tổ hợp vì 6 histidine liền kề nhau ở đầu C của protein tái tổ hợp đã làm tăng ái lực với Ni2+
lên nhiều lần. Các protein cĩ ái lực yếu hơn sẽ bị rửa trơi khỏi cột bằng cách tăng dần nồng độ imidazole trong dung dịch rửa cột. Để loại bỏ hiệu quả các protein tạp của chủng vi khuẩn chủ nhưng khơng loại protein đích p24, chúng tơi đã khảo sát nồng độ imidazole từ 20 mM đến 50 mM để bổ sung vào đệm rửa.
A B C
Hình 3.13: Khảo sát nồng độ Imidazole bổ sung vào đệm rửa trong quá trình tinh chế protein p24 tái tổ hợp
A: Tinh chế với nồng độ Imidazole 20mM B: Tinh chế với nồng độ Imidazole 40mM, C: Tinh chế với nồng độ Imidazole 50mM. Giếng 1(A, B, C): Marker protein
Giếng 2-10 (A, B, C): Các phân đoạn protein thu được sau khi đẩy ra khỏi cột.
Kết quả điện di đồ cho thấy khi bổ sung nồng độ Imidazole 50 mM trong đệm rửa thì loại bỏ được hầu hết các protein tạp, thu được protein tái tổ hợp tương đối sạch (hình 3.13C). Vì vậy chúng tơi chọn phương án bổ sung 50 mM Imidazole vào đệm rửa trong quá trình tinh sạch protein tái tổ hợp.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 kDa kDa 116 66,2 45 35 25 18
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn