Quá trình sản xuất vacxin Tụ Dấu lợn nhược ựộc ựược chia thành các giai ựoạn: sản xuất môi trường, nhân giống sản xuất, sản xuất canh khuẩn vacxin, ra chai, kiểm nghiệm vacxin (hình 3.1).
Kết thúc công ựoạn chế tạo môi trường, môi trường Tụ Dấu sẽ ựược san vào các bình thuỷ tinh 20 lắt và tiệt trùng ở nhiệt ựộ 1160C/ 30 phút. Thành phẩm môi trường Tụ Dấu ựược ựánh giá chất lượng thông qua các chỉ tiêu muối, ựạm amin, pH, pepton, tryptophan và tổng ựạm. Môi trường ựạt chỉ tiêu về chất lượng ựược sử dụng ựể cấy giống sản xuất và chế tạo vacxin. Giống sản xuất ựược tạo ra theo phương thức cấy trực tiếp cùng lúc giống VR2 và AvPS-3 với tỷ lệ chiếm 1-2% môi trường nuôi cấy. Sau khi cấy giống sản xuất hoàn tất, tiếp tục ủ bình giống VR2 và AvPS-3 ở nhiệt ựộ 370C trong vòng 24 giờ. Sau 24 giờ, chuyển tiếp canh khuẩn giống VR2 và AvPS-3 vào bình sản xuất chứa môi trường Tụ Dấu với tỷ lệ 1-2%, tiếp tục ủ bình sản xuất ở 370C trong 48 giờ. Thời ựiểm 48 giờ tiến hành lấy mẫu ựể xác ựịnh số lượng vi khuẩn THT chủng AvPS-3 và vi khuẩn đD chủng VR2 cũng như kiểm tra thuần khiết canh khuẩn vacxin trên các môi trường nước thịt, thạch máu, nước thịt gan yếm khắ và thạch nấm. Kết thúc 48 giờ nuôi cấy tiến hành ra chai vacxin. Lấy mẫu kiểm nghiệm vacxin. Sản phẩm sau khi ra chai ựược lưu kho ở 2-80C.
Công nghệ chế tạo vacxin Tụ Dấu lợn nhược ựộc dựa trên kỹ thuật nuôi cấy vi khuẩn THT và đD trên môi trường TTGPA dạng lỏng (môi trường Tụ Dấu). Do ựó, môi trường Tụ Dấu là một trong những yếu tố quyết ựịnh ựến chất lượng vacxin Tụ Dấu lợn nhược ựộc bên cạnh các yếu tố khác như: giống vi khuẩn vacxin, kỹ thuật chế tạo, trang thiết bị v.v... được phát triển từ năm 1986, trải qua nhiều năm nghiên cứu cùng với những kinh nghiệm quý báu ựã ựược tắch lũy. Cho ựến nay, kỹ
thuật chế tạo môi trường Tụ Dấu ựã hoàn thiện hơn trước, góp phần nâng cao chất lượng vacxin Tụ Dấu trong những năm qua.
Hình 3.1. Tiến trình sản xuất vacxin Tụ Dấu lợn nhược ựộc tại Xắ nghiệp thuốc Thú y Trung ương
Chế tạo môi trường Tụ Dấu
Nhập kho Nhân giống sản xuất
AvPS-3 và VR2
Sản xuất canh khuẩn vacxin Tụ Dấu lợn nhược ựộc Ra chai vacxin Xác ựịnh số lượng vi khuẩn THT và đD trong canh khuẩn vacxin Kiểm tra thuần khiết canh khuẩn vacxin
Kiểm nghiệm: thuần
khiết, an toàn, hiệu lực 24 giờ 48 giờ 48 giờ 48 giờ Lấy mẫu
Tiếp cận theo quá trình sản xuất, môi trường Tụ Dấu chắnh là yếu tố ựầu vào của vacxin Tụ Dấu lợn nhược ựộc. Việc kiểm soát tốt chất lượng nguyên liệu ựầu vào sẽ tạo ựiều kiện thuận lợi trong công tác giám sát chất lượng vacxin ở những công ựoạn tiếp theo.
để ựánh giá chất lượng môi trường Tụ Dấu, tiến hành kiểm tra 3 lô môi trường Tụ Dấu thành phẩm, mỗi lô kiểm tra ba mẫu, mỗi mẫu ựược kiểm tra lần lượt các chỉ tiêu hóa nghiệm NaCl, đạm amin, pH, Pepton, Tryptophan và Tổng ựạm. Phương pháp hóa nghiệm môi trường ựược tiến hành theo quy trình của Xắ nghiệp. Kết quả thu ựược, ựược trình bày ở bảng 3.1.
Kết quả bảng 3.1 cho thấy.
- Lô vacxin I, kiểm tra 3 mẫu môi trường Tụ dấu: + Hàm lượng NaCl ựạt trung bình: 0,857%
+ Hàm lượng đạm amin ựạt trung bình: 1,553 mg/ml + Chỉ số pH ựạt trung bình: 7,450
+ Hàm lượng Pepton ựạt trung bình: 2,167%
+ Hàm lượng Tryptophan ựạt trung bình: 0,289mg/ml + Hàm lượng Tổng ựạm ựạt trung bình: 4,690mg/ml - Lô vacxin II, kiểm tra 3 mẫu môi trường Tụ dấu: + Hàm lượng NaCl ựạt trung bình: 0,853%
+ Hàm lượng đạm amin ựạt trung bình: 1,563 mg/ml + Chỉ số pH ựạt trung bình: 7,500
+ Hàm lượng Pepton ựạt trung bình: 2,163%
+ Hàm lượng Tổng ựạm ựạt trung bình: 4,733mg/ml - Lô vacxin III, kiểm tra 3 mẫu môi trường Tụ dấu:
Bảng 3.1. Kết quả kiểm tra chất lượng môi trường sản xuất vacxin Tụ Dấu lợn nhược ựộc Chỉ tiêu kiểm tra
Lô
vacxin Mẫu kiểm tra NaCl (%) đạm amin (mg/ml) pH Pepton
(%) Tryptophan (mg/ml) Tổng ựạm (mg/ml) 1 0,860 1,550 7,450 2,180 0,289 4,630 2 0,850 1,550 7,480 2,150 0,288 4,680 3 0,860 1,560 7,420 2,170 0,290 4,760 I Trung bình 0,857 1,553 7,450 2,167 0,289 4,690 1 0,860 1,550 7,500 2,160 0,287 4,690 2 0,850 1,560 7,490 2,180 0,289 4,720 3 0,850 1,580 7,510 2,150 0,287 4,790 II Trung bình 0,853 1,563 7,500 2,163 0,288 4,733 1 0,860 1,550 7,460 2,160 0,290 4,670 2 0,870 1,570 7,450 2,140 0,291 4,730 3 0,870 1,580 7,460 2,150 0,289 4,780 III Trung bình 0,867 1,567 7,460 2,150 0,290 4,727
+ Hàm lượng NaCl ựạt trung bình: 0,867%
+ Hàm lượng đạm amin ựạt trung bình: 1,567 mg/ml + Chỉ số pH ựạt trung bình: 7,460
+ Hàm lượng Pepton ựạt trung bình: 2,150%
+ Hàm lượng Tryptophan ựạt trung bình: 0,290mg/ml + Hàm lượng Tổng ựạm ựạt trung bình: 4,727mg/ml
Theo Nguyễn Văn Lãm 1986, chỉ số hóa nghiệm môi trường Tụ Dấu như sau: - đạm amin (mg/ml) ựạt trung bình: 1,15 ổ 0,18
- Pepton (%) ựạt trung bình: 1,8ổ 0,5
- Tryptophan (mg/ml) ựạt trung bình: 0,038 ổ 0,013 - Tổng ựạm (mg/ml) ựạt trung bình: 4,45 ổ 0,65
đối chiếu kết quả hóa nghiệm của 3 lô môi trường Tụ Dấu với kết quả hoá nghiệm môi trường Tụ Dấu ựã ựược công bố bởi Nguyễn Văn Lãm 1986 cho thấy, kết quả hóa nghiệm của môi trường Tụ Dấu sản xuất 3 lô vacxin Tụ Dấu lợn nhược ựộc do chúng tôi nghiên cứu có chỉ số hoá nghiệm cao hơn.
Như vậy, môi trường Tụ Dấu sản xuất tại Xắ nghiệp thuốc Thú y Trung ương có chất lượng tốt, ổn ựịnh với các chỉ số NaCl 0,860%, đạm amin 1,560 mg/ml, pH: 7,470, Pepton 2,160%, Tryptophan 0,289 mg/ml, Tổng ựạm 4,720 mg/ml.