2. Phƣơng pháp
2.1. Phƣơng pháp thu nhận buồng trứng.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 35
Buồng trứng bóng, nhiều nang, nang mọng và to đều. kích thƣớc nang trung bình là từ 2-6mm màu trắng hồng.
Buồng trứng đƣợc thu và rửa qua nƣớc rửa buồng trứng 4 lần, sau đó cho vào bình giữ nhiệt ở 370C trong suốt thời gian vận chuyển.
Sau khi vận chuyển buồng trứng về phịng thí nghiệm thì cắt bỏ phần vòi trứng và loại bỏ máu còn đọng lại, rửa thật kĩ nhiều lần bằng dung dịch nƣớc muối sinh lý có bổ sung kháng sinh gentamycin.
Phương pháp thu và phân loại trứng.
Để khảo sát ảnh hƣởng của kích thƣớc nang lên sự thành thục của tế bào trứng lợn, chúng tôi tiến hành phƣơng pháp thu trứng ở các nang có kích thƣớc >3mm và nang có kích thƣớc từ 2-3mm. Mỗi thí nghiệm sử dụng 10 buồng trứng. Buồng trứng sau khi rửa, tiến hành thu trứng bằng phƣơng pháp chọc hút, những nang có kích thƣớc > 3mm trƣớc. Sau đó thu những nang có kích thƣớc 2- 3 mm bằng phƣơng pháp chọc hút.
Cho buồng trứng đã sạch vào đĩa Petri
Sử dụng xilanh 10ml với đầu kim 23G để tiến hành hút khoảng 1,5ml dung dịch nƣớc rửa trứng, sau đó tiến hành hút trứng và dịch nang.
Chọn những nang có kích thƣớc lớn hơn 3 mm thu trƣớc.
Tiến hành giữ trứng và dịch nang trong tupe 15ml và để trong tủ nuôi để trứng lắng xuống dƣới.
Tiếptheo thu trứng trong nang có kích thƣớc từ 2-3 mm tƣơng tự nhƣ trên Sau khoảng 15 phút tiến hành loại bỏ phần dịch ở trên, thu phần lắng phía dƣới và cho vào dung dịch nƣớc rửa trứng để làm loãng.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 36
Dùng kim hút trứng và kính hiển vi để tiến hành thu trứng, Trứng đƣợc rửa lại trong nƣớc rửa trứng 4 lần và trong mơi trƣờng ni 2 lần thì tiến hành ni trong mơi trƣờng IVM1 (Hình 10)