5. Thời gian
2.4.1. Phƣơng phỏp xử lý mẫu
Với gà, vịt cũn sống, mẫu bệnh phẩm đƣợc lấy là: dịch ngoỏy mũi; dịch ngoỏy họng; dịch ngoỏy khớ quản; dịch ngoỏy ổ nhớp; mẫu phõn; mỏu.
Đối với gà, vịt chết mẫu cần lấy là: khớ quản, dịch khớ quản; dịch rửa phế nang của phế quản; khớ quản, phổi; cỏc tổ chức phủ tạng khỏc: nóo, gan, lỏch, thận, tuyến tuỵ… Việc lấy mẫu phải đƣợc tiến hành đỳng lỳc, đỳng vị trớ, đỳng kỹ thuật. Cỏc mẫu dựng để phõn lập virus tốt nhất đƣợc lấy trong vũng 3 ngày đầu sau khi gia cầm cú biểu hiện triệu chứng bệnh cỳm.
Mẫu đƣợc giữ ở 40C và phải tiến hành phõn lập vi rỳt trong phạm vi 48 giờ kể từ khi lấy mẫu. Nếu cần bảo quản trong thời gian dài hơn thỡ phải giữ ở nhiệt độ -700
C.
Xử lý bệnh phẩm
a) Bệnh phẩm là dịch ngoỏy khớ quản, hậu mụn và phõn:
Bệnh phẩm đƣợc làm ấm, thờm khỏng sinh, lắc, trộn đều, để nhiệt độ phũng 30 phỳt, dịch ngoỏy hậu mụn và phõn cú thể lọc qua màng lọc, sau đú dựng để tiờm truyền.
b) Bệnh phẩm là tổ chức:
Nghiền mẫu bệnh phẩm (phổi, khớ quản, nóo…) trong PBS pH 7,2 thành huyễn dịch 10%. Ly tõm huyễn dịch 1000 vũng/phỳt trong 10 phỳt, thu dịch nổi. Bổ sung lƣợng khỏng sinh 10x
(đặc 10 lần) gồm Kanamycin, Penicillin, Streptomycin theo tỷ lệ 1/10 vào huyễn dịch bệnh phẩm trờn, để trong tủ lạnh 40C ớt nhất trong vũng 2 giờ để khỏng sinh diệt cỏc tạp trựng. Cỏc huyễn dịch bệnh phẩm nếu khụng đƣợc xử lý khỏng sinh thỡ cú thể lọc qua màng lọc 0,45àl hoặc 0,22àl. Huyễn dịch bệnh phẩm đó xử lý, nếu chƣa dựng phõn lập vi rỳt ngay thỡ cú thể giữ ở -700
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
56
c) Bệnh phẩm là mỏu
Mỏu gia cầm đƣợc đựng trong ống ly tõm nhỏ (ống Eppendorf), ly tõm với tốc độ 1500 vũng trong 5 phỳt để tỏch riờng huyết thanh. Dựng pipette hỳt huyết thanh ở trờn đƣa sang ống khỏc. Huyết thanh này bảo quản ở +40
C và đƣợc dựng trong phản ứng HI, sau đú cú thể lƣu giữ ở - 300
C.