II. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
4. Phương pháp phân lập và định danh:
Các mẫu nước tiểu dương tính (có vi khuẩn mọc) khi cấy định lượng cũng được xem là kết quả phân lập vi khuẩn trong nước tiểu. Các vi khuẩn này được tiến hành định danh bằng bộ KIT định danh vi khuẩn API 10S của Biomérieux.
4.1. Chuẩn bị:
-Mẫu cấy dương tính.
-Nước muối sinh lý vô trùng. -Bơm tiêm vô trùng.
-Tube đựng huyền dịch vi khuẩn (loại 5 ml). -Bộ định danh API 10S của Biomérieux. -Giá đỡ.
4.2. Các bước tiến hành:
Toàn bộ các thao tác trong quá trình này đều được thực hiện trong tủ an toàn sinh học với điều kiện vô trùng, và theo hướng dẫn kèm theo trong mỗi bộ sản phẩm API 10S.
4.2.1. Pha huyền dịch vi khuẩn:
Cho vào tube đựng khoảng 3-5 ml nước muối sinh lý. Chọn khuẩn lạc điển hình mọc trên môi trường MC. Dùng que cấy thường lấy một lượng vi khuẩn từ khuẩn lạc vừa đủ hoà tan vào dịch nước muối sinh lý nói trên để được huyền dịch vi khuẩn. Lắc để vi khuẩn phân bố đều trong huyền dịch.
4.2.2. Thao tác với bộ KIT API 10S:
-Dùng bơm tiêm vô khuẩn hút huyền dịch vi khuẩn và nạp vào các giếng của bộ KIT theo hướng dẫn:
+Đối với các giếng thử nghiệm ONPG, GLU, ARA, LDC, ODC, H2S, URE, TDA, IND, huyền dịch vi khuẩn chỉ được bơm đến miệng của mỗi giếng.
+Đối với giếng CIT, huyền dịch vi khuẩn phải được bơm đầy vào giếng.
+Đối với thử nghiệm OX, nhỏ trực tiếp huyền dịch vi khuẩn lên đĩa giấy Oxidase và đọc kết quả.
-Đối với các giếng LDC, ODC, H2S, URE, sau khi nạp huyền dịch vi khuẩn, nhỏ thêm lớp dầu khoáng vào mỗi giếng cho đến khi lấp hết phần trống còn lại ở miệng mỗi giếng.
4.2.3. Đọc kết quả định danh vi khuẩn bằng bộ KIT API 10S:
Kết quả định danh vi khuẩn được đọc theo hướng dẫn kèm theo trong mỗi bộ KIT. Trước khi đọc kết quả cần nhỏ các thuốc thử vào các giếng như sau:
-TDA: Nhỏ một giọt TDA vào giếng thử nghiệm TDA. -IND: Nhỏ một giọt JAMES vào giếng thử nghiệm IND.
-NO2: Nhỏ một giọt NIT 1 và một giọt NIT 2 vào giếng thử nghiệm GLU (sau khi đã ghi nhận kết quả thử nghiệm GLU). Chờ khoảng 2 đến 5 phút. Màu đỏ xuất hiện trong giếng được ghi nhận là dương tính.
Kết quả thử nghiệm sinh hoá âm tính:
Hình 2.7: Kết quả thử nghiệm sinh hoá âm tính của bộ KIT API 10S (Biomérieux). Kết quả thử nghiệm sinh hoá dương tính:
Hình 2.8: Kết quả thử nghiệm sinh hoá dương tính của bộ KIT API 10S (Biomérieux).