Cách thông thường nhất ựể xác ựịnh viêm vú cận lâm sàng là dựa vào số lượng tế bào bản thể (somatic cell counts: SCC) trong sữa, qua ựó có thể ựánh giá mức ựộ
viêm vú. Bình thường, 80% sữa sạch chứa ắt hơn 100.000 tế bào/ ml sữa, 20% có lượng tế bào lớn hơn 100.000 tế bào/ ml và chỉ có 5% trên 300.000 tế bào/ ml. Sự tăng số lượng tế bào này thường do ảnh hưởng của tình trạng viêm vú.
1.4.2.1 đếm số lượng tế bào trong sữa
Tế bào bản thể hiện diện trong sữa bò bình thường chủ yếu là ựại thực bào, chiếm 66 - 88%. Ngoài ra sữa bình thường còn có tế bào lympho (B hoặc T) 10 - 27%; tế bào biểu mô 0 - 7%. Tỉ lệ bạch cầu trung tắnh trong sữa bò bình thường rất thấp chỉ khoảng 1 - 11%, trung bình 2%. Nhưng khi bò bị viêm vú, số lượng tế bào bản thể tăng lên rất cao và chủ yếu là bạch cầu trung tắnh (90%).
Có nhiều phương pháp xác ựịnh số lượng tế bào trong sữa như dùng máy ựếm
ựiện tử hoặc ựếm trực tiếp trên kắnh hiển vi sau khi nhuộm hoặc có thểước lượng gián tiếp qua phương pháp CMT: California Mastitis Test.
Bảng 1.2 Liên hệ giữa số lượng từng loại tế bào trong sữa và tình trạng sức khỏe bầu vú bò
Tỉ lệ các loại tế bào trong 1 ml sữa (%) Tình trạng vú Lâm ba cầu Bạch cầu trung tắnh Biểu mô và ựại thực bào Tế bào ly giải Khỏe 5,2 7,5 68,9 18,4 Nhiễm S. aureus 2,8 49,0 35,5 12,7 Nhiễm S. agalactiae 5,0 41,0 41,1 12,9 (Nguồn: Badinand, 1999)
1.4.2.2 định lượng tế bào trong sữa bằng phương pháp gián tiếp CMT (California Mastitis Test)
Dụng cụ: - Thuốc thử CMT
- Khay thử CMT (có 4 ô riêng biệt).
Nguyên lý: Thuốc thử CMT có tắnh chất tẩy, nó tác ựộng phá hủy màng tế bào và gắn với ADN ựược giải phóng ra. Khi bò bị viêm vú (trong sữa có trên 500.000 TB/ml sữa) chúng làm thay ựổi trạng thái ban ựầu của sữa, sữa trở thành một hỗn hợp nhớt.
Thành phần của thuốc thử CMT bao gồm (theo công thức của Viện thú y Quốc gia):
- Deterol 85- 90% 50g
- Bromo Cresol tinh khiết 0,1g - Nước cất vừa ựủ 1lit
Cách tiến hành: Do lượng tế bào thân có xu hướng tăng trong thời gian tiết sữa vẫn giữ số lượng cao trong nhiều giờ sau (kể cả ở những núm vú không bị bệnh) nên sữa ựược lấy ựể tiến hành thử nghiệm là sữa ựầu tiên của lần vắt sữa ựó (sau khi ựã kắch thắch bò tiết sữa và loại bỏ những giọt sữa ựầu tiên). Vắt sữa của từng núm vú vào từng ô của khay thử CMT, sau ựó cho một lượng tương ựương thuốc thử CMT vào và lắc tròn khay. Kết quảựược ựánh giá theo thang chuẩn sau:
Bảng 1.3: Thang mẫu chuẩn chẩn ựoán CMT
(Sandholn và cộng sự, 1995)
Mức ựộ phản ứng
Trạng thái và màu của hỗn hợp sữa- thuốc thử
Số lượng tế bào than (TB/1ml sữa)
(-) Âm tắnh
- Trạng thái sữa không ựổi.
- Giữ nguyên màu thuốc thử. < 200.000
(ổ) Nghi ngờ - Sữa hơi có vệt nhớt khi nghiêng ựĩa. - Màu của hỗn hợp không ựổi. 150.000- 500.000 (+, ++) Dương tắnh - Sữa hơi dắnh nhớt.
- Thuốc thử hơi chuyển màu. 400.000- 1.500.000 (+++)
Dương tắnh
- Sữa quánh lại nhưng khi nghiêng ựĩa vẫn trôi.
- Thuốc thử có màu ựậm hơn.
800.000- 5.000.000 (++++)
Dương tắnh
- Sữa ựóng quánh lại, không bị trôi khi
nghiêng ựĩa. >5.000.000
Kết quả kiểm tra ở mỗi bò phải ựược ghi lại ựể tham khảo sau này. Khi ghi lại như vậy và cùng với các lần khác, ta có thể tìm ra các trường hợp nhiễm bệnh cận lâm sàng, các trường hợp nhiễm bệnh cận lâm sàng này ta sẽ không biết trước cho tới khi bệnh nặng hơn. Tuy nhiên, phương pháp CMT sẽ không xác ựịnh ựược một cách chắnh xác là bò nào cần ựược ựiều trị bởi vì chỉ có 60% bò với lượng tế bào thân lớn hơn 500.000/1ml sữa là thực sự nhiễm bệnh viêm vú. Do ựó, ựể có kết quả chắnh xác bò cần ựiều trị, người ta cần phải áp dụng nhiều phương pháp chẩn ựoán khác và tiếp tục theo dõi mới có thể khẳng ựịnh ựược.
Hình 1.2: Dụng cụ và thuốc thử CMT Hình 1.3: Vắt sữa vào khay
Hình 1.4: Cho thuốc thử vào Hình 1.5: đọc kết quả
Những chú ý khi ựọc kết quả CMT
+ Kết quả âm tắnh hay nghi ngờ khi thử CMT thì phải xem xét và cân nhắc cẩn thận. Kết quả âm tắnh không có nghĩa là hoàn toàn không có bệnh.
+ đây là phương pháp ựọc có tắnh chủ quan của người ựọc.
+ Khi ựể lâu có thể gây âm tắnh giả bởi gel sẽ biến mất sau một thời gian ngắn. + Sử dụng phương pháp này ngay khi vắt sữa cho kết quả chắnh xác hơn sữa bảo quản qua 24 giờ.
+ Tỉ lệ chất béo trong sữa cao ảnh hưởng ựến sự chuyển màu của bromocresol. Daniel và ctv., chứng minh kết quả CMT còn tùy thuộc vào ựàn gia súc ựang cho sữa có tỉ lệ chất béo cao hay thấp.
1.4.2.3 Phân lập, ựịnh danh vi khuẩn trong sữa
Phân lập vi khuẩn trong sữa ựược thực hiện trên những mẫu sữa có số lượng tế
bào bản thể cao và kéo dài, mẫu sữa có thể ựược thu thập riêng của từng thùy vú hay hỗn hợp của từng cá thể ựể xác ựịnh nguyên nhân gây bệnh trên từng cá thể bò. Vì vậy, ựây là phương pháp tin cậy nhất giúp lựa chọn loại kháng sinh tối ưu sử dụng trong ựiều trị.
