2.2.2.1. Định nghĩa – Nguyên tắc
Đường cong tăng trưởng của tế bào được xác định dựa vào sự gia tăng tổng số tế bào sống theo thời gian [26].
2.2.2.2. Các bước thực hiện
Tế bào MDCK được nuơi cấy trong các plate 12 giếng.
• Sau mỗi 24 giờ, đếm số tế bào sống ở 1 giếng (đếm tổng số tế bào sống trong 4 ơ lớn của buồng đếm Neubauer ngoại trừ những tế bào nằm trên các cạnh cĩ dấu gạch chéo như trên Hình 2.2).
• Tổng số tế bào sống trong dịch huyền phù (N) được tính theo cơng thức sau: N = (n/4) x a x 104 x V [23] với * n: tổng số tế bào sống đếm được trong 4 ơ lớn của buồng đếm
* a: hệ số pha lỗng của huyền phù tế bào trong trypan blue (do tế bào và trypan blue được trộn theo tỉ lệ 1:1 nên a = 2) * 104: hệ số của buồng đếm
* V: thể tích của huyền phù tế bào đơn (ml) (trong trường hợp này, V = 1ml)
Hình 2.2. Phương pháp đếm tế bào bằng buồng đếm Neubauer.
Từ số tế bào sống đếm và tính tốn được sau mỗi 24 giờ nuơi cấy, tiến hành vẽ đồ thị đường cong tăng trưởng của tế bào (Hình 2.3).
Dựa vào đường cong tăng trưởng, các thơng số về đặc điểm tăng trưởng của tế bào được xác định theo các cơng thức sau:
2. Vật liệu – Phương pháp
Luận văn Thạc sĩ Sinh học – Trần Ngọc Thủy Tiên
27
• Thời gian nhân đơi quần thể: T = 1/r [7], [43] Với * NH: số tế bào tại thời điểm cuối của pha tăng trưởng
* NI: số tế bào tại thời điểm bắt đầu của pha tăng trưởng * t1: thời điểm bắt đầu của pha tăng trưởng (giờ)
* t2: thời điểm cuối của pha tăng trưởng ((giờ)
Pha tiềm tàng
Tổng số tế bào sống
Ngày
Pha tăng trưởng
Pha ổn định và suy tàn
Hình 2.3. Mơ hình đường cong tăng trưởng của tế bào.
NH
NI
t1 t2