Xử lý mẫu:
- Mẫu:
+ Tôm: Thu lấy phần nội tạng (ruột, gan, tụy,…) của từng mẫu cho vào túi PE vô trùng.
+ Cua: Lột vỏ, thu lấy phần nội tạng (gạch, ruột, gan, tụy,…) cho vào túi PE vô trùng.
+ Mực: Rút đầu, thu lấy phần nội tạng (ruột,…) cho vào túi PE vô trùng. Tùy vào khối lượng của từng mẫu thêm vào dung dịch APW với thể tích thích hợp theo tỉ lệ 1:9.
- Đồng nhất mẫu: Chuẩn bị mẫu xong, cho vào túi PE có chứa mẫu và APW, đem đi đồng nhất mẫu bằng máy dập mẫu. Thời gian đồng nhất mỗi mẫu từ 90 đến 120 giây.
- Ủ mẫu đã dập với APW ở 370C trong thời gian 6-8 giờ trong tủ ấm. - Pha loãng dịch ủ:
+ Rót 9 ml dung dịch nước muối sinh lý đã hấp khử trùng vào các ống nghiệm.
+ Hút 1ml dịch mẫu đã ủ từ các túi PE vào ống nghiệm, thu được dịch mẫu pha loãng với nồng độ 10-1, rồi đưa lên máy vortex để trộn đều.
+ Từ ống nghiệm 10-1, pha loãng ra ống nghiệm có nồng độ thấp hơn 10-2 bằng cách hút 1ml từ ống nghiệm 10-1 cho vào 9 ml dung dịch nước muối sinh lý đã hấp khử trùng ở ống nghiệm khác, rồi đưa lên máy vortex để trộn đều, thu được ống nghiệm có độ pha loãng mẫu 10-2, tiếp tục làm tương tự, ta có các ống nghiệm có độ pha loãng mẫu 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 .
- Cấy trang:
+ Thao tác trong tủ cấy vô trùng, môi trường vô trùng, các dụng cụ đã sấy tiệt trùng ở 1600C/120 phút và các thao tác vi sinh làm bên cạnh ngọn lửa đèn cồn.
+ Ðun sôi môi trường TCBS để hoà tan hoàn toàn các thành phần rồi để nguội tới nhiệt độ khoảng 400
C. Rót 15 - 20 ml vào các đĩa petri vô trùng. Để khi thạch trong đĩa nguội hoàn toàn rồi bắt đầu cấy.
+ Hút 100 µl dịch mẫu các nồng độ từ ống nghiệm cho vào các đĩa Petri có thạch đã đánh dấu tương ứng.
+ Dùng que cấy trang trang đều dịch mẫu ra bề mặt thạch, sau đó lật úp các đĩa Petri lại.
+ Dùng giấy báo bao gói kín các đĩa Petri lại, đem đặt trong tủ ấm trong tư thế các đĩa Petri nằm úp.
+ Sau 24 giờ, quan sát các khuẩn lạc mọc trên bề mặt thạch. - Cấy ria khuẩn lạc trên TCBS:
+ Môi trường TCBS đã nấu sẵn, đợi nguội khoảng 40-45OC, đổ 10-15 ml ra các đĩa petri đã sấy sẵn, đợi cho thạch nguội và đông lại.
+ Sau khi cấy trang, chọn các khuẩn lạc có hình thái đặc trưng với vi khuẩn
Vibrio parahaemolyticus trên môi trường thạch TCBS, khuẩn lạc có màu xanh, rìa tròn xanh nhạt, tâm xanh đậm, đường kính khuẩn lạc khoảng 2- 4 mm.
+ Dùng que cấy thu sinh khối các khuẩn lạc đã chọn, cấy ria thành 3 đường trên đĩa thạch cho đến khi các khuẩn lạc thuần chủng được tạo ra.
+ Sau khi cấy, lật ngược đĩa thạch lại, bao gói bằng giấy báo và để tư thế đĩa thạch như vậy trong tủ ấm 37OC trong 24 giờ.