a. Khả năng chịu muối của các chủng Vibrio
Bảng 3.2. Khả năng chịu muối của các chủng Vibrio Chủng Nồng độ NaCl (%) C1 C2 C7 C15 C23 0 − − − − − 3 + + + + + 6 + + + + + 8 − + + − + 10 − − − − −
Các chủng Vibrio nuôi trong môi trường chứa trypton và muối NaCl ở các nồng độ khác nhau 0%, 3%, 6%, 8%, 10% ở pH 7,2 ± 0,2 nhiệt độ 37o
C. Khả năng sống (làm đục môi trường và tạo váng) được quan sát sau 24 giờ, 48 giờ và 72 giờ nuôi cấy. Kết quả từ bảng 3.1 cho thấy tất cả các chủng không sống được trong môi trường không có NaCl nên ở các khu vực nước ngọt (sông, hồ) vi khuẩn không sinh trưởng, phát triển và nhu cầu của chúng đối với Na+ là bắt buộc.
Nồng độ muối các chủng vi khuẩn này sinh trưởng nằm trong khoảng 3-8%, có chủng không mọc ở nồng độ 8% như chủng là C15 và C1. Các chủng phát triển mạnh nhất ở nồng độ 3%, gây đục môi trường, chứng tỏ nhóm vi khuẩn này sống tốt ở ngoài vùng biển có độ mặn không quá cao. Vì các chủng vi khuẩn sống được ở các nồng độ muối như trên, nên hải sản như: tôm, cua và cá biển là các đối tượng chính để phân lập vi khuẩn này. Ở nồng độ muối 6%, các chủng phát triển nhưng gây đục ít hơn 3% chứng tỏ đây chỉ là vùng lân cận, gần như là giới hạn trên đối với khả năng chịu muối của chúng . Ở 10% không có chủng vi khuẩn nào phát triển bởi nồng độ muối quá cao. Vì vậy ở các nghiên cứu tiếp theo, các môi trường đều được bổ sung 3% muối vào.
a. Khả năng lên men đƣờng của các chủng Vibrio
Các chủng phân lập được nuôi trong ống nghiệm chứa môi trường để lên men một trong các loại đường như mannitol, sucrose, lactose, arabinose, mantose ở
pH 7,4 và nhiệt độ 370C. Kết quả quan sát sau 24 giờ, 48 giờ và 72 giờ cho thấy các chủng đều lên men đường arabinose, mantose, mannitol và không lên men đường lactose, sucrose. Kết quả được thể hiện ở hình 3.6 và bảng 3.3.
Hình 3.6. Thí nghiệm lên men đƣờng của chủng vi khuẩn C15 (A) và C2 (B)
(1-mannitol, 2-sucrose, 3-lactose, 4-arabinose, 5-mantose, 6- đối chứng âm)
Bảng 3.3. Khả năng lên men đƣờng của các chủng vi khuẩn Vibrio
Chủng Loại đƣờng C1 C2 C7 C15 C23 Lactose _ _ _ _ _ Arabinose + + + + + Sucrose _ _ _ _ _ Mantose + + + + + Mannitol + + + + +
Đối với đường arabinose, mantose, mannitol khả năng lên men của các chủng phân tích là khác nhau, biểu thị qua màu sắc môi trường sau lên men. Kết quả cho thấy màu sắc trong môi trường sau lên men là khác nhau, ở chủng C15 làm canh trường manitol chuyển sang màu cam đục và canh trường mantose, sucrose có màu cam trong. Có sự khác nhau như vậy là do các sản phẩm (rượu, các acid hữu
B A
1 2 3 4 5 6
cơ, CO2) trong quá trình lên men sinh ra khác nhau về hàm lượng, tốc độ, làm pH ôi trường cũng khác nhau nên chúng làm thay đổi màu chỉ thị. Đối với hai loại đường còn lại là lactose và sucrose, do không có enzyme phân giải nên kết quả lên men là âm tính vì vậy môi trường vẫn giữ nguyên màu đỏ ban đầu của môi trường lên men.
b. Khả năng sử dụng lysin của các chủng Vibrio
Các chủng vi khuẩn Vibrio nuôi ở 370C trong môi trường cơ bản chứa lysin. Khả năng sử dụng lysin được đánh giá qua sự đổi màu của môi trường nuôi. Nếu các chủng vi khuẩn có enzyme phân giải thì enzyme này sẽ xúc tác cắt bỏ nhóm carboxyl (-COOH), phóng thích CO2, tạo ra các sản phẩm có tính acid làm thay đổi màu môi trường chứa chỉ thị phenol đỏ. Sau thời gian nuôi cấy là 24 giờ, 48 giờ và 72 giờ kết quả quan sát từ hình 3.7 và bảng 3.3 cho thấy có sự đổi màu môi trường nuôi đối với các chủng C1, C2, C7, C15 và không đổi màu ở môi trường nuôi chủng C23.
Hình 3.7. Thí nghiệm sử dụng lysin của các chủng Vibrio
( 1-C23, 2- C7, 3- C15, 4-C2, 5-C1, 6-đối chứng âm)
Bảng 3.4. Khả năng sử dụng lysin của các chủng vi khuẩn Chủng giám định Kết quả C1 + C2 + C7 + C2 + C23 - 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6
Đối với chủng C23, các đặc tính sinh hóa đã kiểm tra đều cho kết quả giống với chủng Vibrio parahaemolyticus nhưng khi kiểm tra khả năng sử dụng lysin thì trái ngược. Không chỉ vì chúng không sử dụng lysin mà có thể kết luận ngay rằng chúng không thuộc loài này, có thể các quá trình chuyển hóa các chất trong tế bào đã bị thiếu hụt hay bị khuyết con đường chuyển hóa lysin. Vì vậy tiếp tục nuôi cấy và tách DNA, thực hiện phản ứng PCR để xác nhận.