NGUYÊN CỦA ANH
4.3.1. Kết quả xác ựịnh kháng thể cúm gia cầm khi sử dụng sản phẩm kháng nguyên cúm và kháng nguyên của Anh
Sản phẩm kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 sau khi ựảm bảo tất cả các yêu cầu về ựộ vô trùng, ựộ nhạy, ựộ ựặc hiệụ để ựánh giá chất lượng của sản phẩm kháng nguyên, chúng tôi tiến hành so sánh sản phẩm kháng
nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 với kháng nguyên của Anh
(A/Ck/Scot/59) bằng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu-HỊ
đây là một trong những tiêu chắ quan trọng. Sản phẩm kháng nguyên cúm phải có kết quả tương ựương với kháng nguyên của Anh ựang ựược sử dụng ở hệ thống phòng thắ nghiệm thú y trong nước.
Chúng tôi tiến hành thu thập 3000 mẫu huyết thanh gia cầm (gà, vịt) tại một số ựịa phương (Hà Nội, Nam định, Vĩnh Phúc) thực hiện phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu-HỊ
Kết quả xác ựinh kháng thể cúm gia cầm bằng phản ứng-HI khi sử dụng kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 với kháng nguyên cúm của Anh
Bảng 4.8. Kết quả xác ựịnh kháng thể cúm gia cầm một số tỉnh khi sử dụng kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 và kháng nguyên của Anh
Kháng nguyên địa ựiểm Kết quả
kiểm tra
A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 A/Ck/Scot/59
Số mẫu xét nghiệm 2635 2635 Số mẫu HI ≥ 4 log2 1737 1842 Hà Nội Tỷ lệ bảo hộ (%) 65,92 69,91 Số mẫu xét nghiệm 142 142 Số mẫu HI ≥ 4 log2 81 86 Nam định Tỷ lệ bảo hộ (%) 57,04 60,56 Số mẫu xét nghiệm 223 223 Số mẫu HI ≥ 4 log2 217 217 Vĩnh Phúc Tỷ lệ bảo hộ (%) 97,31 97,31 Số mẫu xét nghiệm 3000 3000 Số mẫu HI ≥ 4 log2 2035 2145 Tổng số Tỷ lệ bảo hộ (%) 69,83 71,50
0 20 40 60 80 100 Hà Nội Nam định Vĩnh Phúc Tổng số A/Vietnam/1203-H5N1 A/Chicken/Scotland/59/H5N1 Hình 4.1. Kết quả xác ựịnh kháng thể cúm một số tỉnh khi sử dụng kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 và kháng nguyên của Anh
Từ bảng 4.8 và hình 4.1 cho thấy:
Mẫu huyết thanh thu thập ở Hà Nội có tỷ lệ bảo hộ là 65,92% với kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 so với tỷ lệ bảo hộ 69,91% với kháng nguyên A/Ck/Scot/59.
Huyết thanh thu thập ở Nam định có tỷ lệ bảo hộ là 57,04% với kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 so với tỷ lệ bảo hộ 60,56% với kháng nguyên A/Ck/Scot/59.
Huyết thanh thu thập ở Vĩnh Phúc có tỷ lệ bảo hộ là 97,31% với kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 tương ựương với tỷ lệ bảo hộ 97,31% với kháng nguyên A/Ck/Scot/59.
Tổng hợp tất cả các mẫu huyết thanh thu thập ở các ựịa phương trên, chúng tôi thấy, trong 3000 mẫu xét nghiệm với kháng nguyên A/Vietnam/1203- H5N1 clade 1 có số mẫu HI ≥ 4 log2 là 2035 mẫu, tương ứng với tỷ lệ bảo hộ là 67,83% và kháng nguyên A/Ck/Scot/59 có số mẫu HI ≥ 4 log2 là 2145 mẫu, tương ứng với tỷ lệ bảo hộ 71,50%.
Như vậy, khi so sánh 2 loại kháng nguyên có chênh lệch về tỷ lệ bảo hộ. Tuy nhiên, về mặt thống kê, tỷ lệ bảo hộ khi sử dụng kháng nguyên
A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 và khi sử dụng kháng nguyên chuẩn của Anh
A/Ck/Scot/59 là không có sự sai khác (kiểm ựịnh χ2 với khoảng tin cậy 95%).
điều này cho thấy, sản phẩm kháng nguyên cúm (A/Vietnam/1203-H5N1
clade 1) cho kết quả xét nghiệm tương ựương với kháng nguyên của Anh (A/Ck/Scot/59).
để có ựánh giá toàn diện hơn về chất lượng của sản phẩm kháng nguyên chúng tôi tiến hành so sánh kết quả xét nghiệm mẫu huyết thanh của gà và vịt khi sử dụng 2 loại kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 và
Bảng 4.9. Kết quả xác ựịnh kháng thể cúm gia cầm ở gà, vịt khi sử dụng kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 và kháng nguyên của Anh
Kháng nguyên đối
tượng
Kết quả
kiểm tra A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 A/Ck/Scot/59
Số mẫu xét nghiệm 2163 2163 Số mẫu HI ≥ 4 log2 1650 1710 Gà Tỷ lệ bảo hộ (%) 76,28 79,06 Số mẫu xét nghiệm 837 837 Số mẫu HI ≥ 4 log2 385 435 Vịt Tỷ lệ bảo hộ (%) 46,00 51,97 Số mẫu xét nghiệm 3000 3000 Số mẫu HI ≥ 4 log2 2035 2145 Tổng số Tỷ lệ bảo hộ (%) 67,83 71,50
0 20 40 60 80 100 Gà Vịt Tổng số A/Vietnam/1203-H5N1 A/Chicken/Scotland/59/H5N1 Hình 4.2. Kết quả xác ựịnh kháng thể cúm ở gà, vịt khi sử dụng kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 và kháng nguyên của Anh
Kết quả ựược trình bày bảng 4.9 và hình 4.2 cho thấy:
Mẫu huyết thanh thu thập trên gà có tỷ lệ bảo hộ là 76.28% với kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 so với tỷ lệ bảo hộ 79,06% với kháng nguyên A/Ck/Scot/59.
Huyết thanh thu thập ở vịt có tỷ lệ bảo hộ là 46,00% với kháng nguyên
A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 so với tỷ lệ bảo hộ 51,97% với kháng nguyên
A/Ck/Scot/59.
Tổng hợp tất cả các mẫu huyết thanh thu thập trên gia cầm (gà, vịt), chúng tôi thấy, trong 3000 mẫu xét nghiệm với kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 có số mẫu HI ≥ 4 log2 là 2035 mẫu, tương ứng với tỷ lệ bảo hộ là 67,83% và kháng nguyên A/Ck/Scot/59 có số mẫu HI ≥ 4 log2 là 2145 mẫu, tương ứng với tỷ lệ bảo hộ là 71,50%.
Như vậy, khi so sánh 2 loại kháng nguyên cúm (theo loài gia cầm) có chênh lệch về tỷ lệ bảo hộ. Tuy nhiên, về mặt thống kê, tỷ lệ bảo hộ khi sử dụng kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 và khi sử dụng kháng nguyên của Anh A/Ck/Scot/59 là không có sự sai khác (kiểm ựịnh χ2 với khoảng tin cậy 95%).
điều này cho thấy, sản phẩm kháng nguyên cúm (A/Vietnam/1203-H5N1
clade 1) cho kết quả xét nghiệm tương ựương với kháng nguyên của Anh (A/Ck/Scot/59).
4.3.2. Phân bố hiệu giá kháng thể khi sử dụng sản phẩm kháng nguyên cúm và kháng nguyên của Anh
đánh giá kết quả xét nghiệm khi sử dụng 2 loại kháng nguyên cúm theo tỷ lệ mẫu dương tắnh mới chỉ dừng lại ở ựịnh tắnh kháng thể. Cần có sự so sánh về mặt ựịnh lượng kháng thể, bởi có thể có sự sai khác kết quả khi sử dụng 2 loại kháng nguyên cúm cho cùng một mẫu huyết thanh. Chúng tôi tiến hành so sánh 2 loại kháng nguyên cúm theo phân bố hiệu giá kháng thể.
Bảng 4.10. Phân bố hiệu giá kháng thể khi sử dụng kháng nguyên
A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 và kháng nguyên của Anh
Kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 A/Ck/Scot/59 HG HI (log2) Số mẫu Tổng (n=3000) Số mẫu Tổng (n=3000) Số mẫu cùng mức HI Tổng (n=1556) 0 558 533 511 1 76 51 22 2 118 110 46 3 213 965 161 855 70 649 4 268 263 117 5 373 382 171 6 446 385 195 7 376 440 183 8 235 304 103 9 168 209 70 10 70 87 29 11 99 2035 75 2145 39 907
Hình 4.3. Phân bố hiệu giá kháng thể khi sử dụng kháng nguyên
A/Vietnam/1203-H5N1clade 1 và kháng nguyên của Anh.
Tử bảng 4.10 và hình 4.3 cho thấy:
Số mẫu ựạt bảo hộ (HI ≥4log2) với kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 là 2035 mẫu và số mẫu ựạt bảo hộ với kháng nguyên của Anh
A/Ck/Scot/59 là 2145 mẫụ
Số mẫu không ựạt bảo hộ (HI< 4log2) với kháng nguyên A/Vietnam/1203- H5N1 clade 1 là 965 mẫu và số mẫu không ựạt bảo hộ với kháng nguyên của Anh A/Ck/Scot/59 là 855 mẫụ
Tổng số có 649 mẫu cho kết quả HI < 4log2 giống nhau với 2 loại kháng nguyên và 907 mẫu cho kết quả HI ≥ 4log2 giống nhau với 2 loại kháng nguyên cúm.
Mối tương quan hiệu giá HI khi sử dụng kháng nguyên A/Vietnam/1203- H5N1 clade 1 và kháng nguyên của Anh A/Ck/Scot/59 ựược thể hiện bằng hệ số tương quan R = 0,83 biểu thị tương quan thuận. Hệ số R tiến sát tới 1 chứng tỏ tương quan này mạnh.
Như vậy, kháng nguyên cúm A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 và kháng nguyên của Anh A/Ck/Scot/59 có mức ựộ tương ựồng caọ
4.3.3 KẾT QUẢ XÁC đỊNH đIỀU KIỆN BẢO QUẢN SẢN PHẨM KHÁNG NGUYÊN CÚM
Sản phẩm kháng nguyên cúm phải ựảm bảo duy trì ổn ựịnh hiệu lực qua thời gian bảo quản và sử dụng.
để ựánh giá ựộ ổn ựịnh của sản phẩm, chúng tôi tiến hành thử nghiệm bảo quản sản phẩm kháng nguyên A/Vietnam/1203-H5N1 clade1 ở các ựiều kiện nhiệt ựộ +40C, -200C và -800C.
Sản phẩm kháng nguyên cúm ựược tiến hành kiểm tra ựịnh kỳ hiệu lực vào các thời ựiểm 1 tuần, 2 tuần, 1 tháng, 3 tháng và 6 tháng.
Kết quả sau 2 lần thử nghiệm xác ựịnh ựiều kiện bảo quản chế phẩm kháng nguyên cúm ựược trình bày ở bảng 4.11:
Bảng 4.11: Kết quả xác ựịnh ựiều kiện bảo quản sản phẩm kháng nguyên cúm Thời gian bảo quản Kháng nguyên
A/Vietnam/1203-H5N1 clade1
1 tuần 2 tuần 1 tháng 3 tháng 6 tháng Lần TN Nhiệt ựộ bảo
quản (t0C)
Kết quả kiểm tra HA (log2)
+40C 10 10 7 2 0 -200C 10 10 8 4 2 1 -800C 10 10 10 10 8 +40C 10 10 7 3 0 -200C 10 10 9 5 0 2 -800C 10 10 10 10 9 Từ bảng 4.11 cho thấy:
Lần thắ nghiệm 1, ở ựiều kiện +40C, sản phẩm kháng nguyên cúm không thay ựổi hiệu giá ở các thời ựiểm 1 tuần, 2 tuần (10 log2), giảm hiệu giá ở thời ựiểm 1 tháng (7 log2), 3 tháng (2 log2) và âm tắnh ở thời ựiểm 6 tháng.
Ở ựiều kiện -200C, sản phẩm kháng kháng nguyên cúm không thay ựổi hiệu giá ở các thời ựiểm 1 tuần, 2 tuần (10 log2), thay ựổi ắt ở thời ựiểm 1 tháng (8 log2) và giảm hiệu giá ở các thời ựiểm 3 tháng, 6 tháng lần lượt là 4 log2 và 2 log2.
Ở ựiều kiện -800C, sản phẩm kháng kháng nguyên cúm không thay ựổi hiệu giá ở các thời ựiểm 1 tuần, 2 tuần, 1 tháng, 3 tháng (10 log2) và thay ựổi ắt ở thời ựiểm 6 tháng (8 log2).
Lần thắ nghiệm 2, ở ựiều kiện +40C, sản phẩm kháng nguyên cúm không thay ựổi hiệu giá ở các thời ựiểm 1 tuần, 2 tuần (10 log2), giảm hiệu giá ở thời ựiểm 1 tháng (7 log2), 3 tháng (3 log2) và âm tắnh ở thời ựiểm 6 tháng.
Ở ựiều kiện -200C, sản phẩm kháng kháng nguyên cúm không thay ựổi hiệu giá ở các thời ựiểm 1 tuần, 2 tuần (10 log2), thay ựổi ắt ở thời ựiểm 1 tháng (9 log2) và giảm hiệu giá ở các thời ựiểm 3 tháng, 6 tháng lần lượt là 5 log2 và 3 log2.
Ở ựiều kiện -800C, sản phẩm kháng kháng nguyên cúm không thay ựổi hiệu giá ở các thời ựiểm 1 tuần, 2 tuần, 1 tháng, 3 tháng (10 log2) và thay ựổi ắt ở thời ựiểm 6 tháng (9 log2).
Như vậy, chất lượng của sản phẩm kháng nguyên cúm A/Vietnam/1203- H5N1 clade 1 duy trì ổn ựịnh tốt ựến 1 tháng ở ựiều kiện nhiệt ựộ +40C, -200C. Ở nhiệt ựộ -800C sản phẩm ổn ựịnh chất lượng cho ựến tháng thứ 6.
PHẦN V
KẾT LUẬN-đỀ NGHỊ 5.1. KẾT LUẬN
Từ kết quả nghiên cứu của ựề tài, chúng tôi có một số kết luận sau:
1. Giống virus cúm A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 có tắnh ổn ựịnh ựể nghiên cứu sản xuất kháng nguyên và nồng ựộ pha loãng virus cho nhân giống là 10-4. 2. Giống virus nhược ựộc A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 ựảm bảo tắnh an toàn. để vô hoạt hoàn toàn virus cúm sử dụng nồng ựộ formaldehyde với tỷ lệ 10/000. - Kháng nguyên cúm A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 ựạt chỉ tiêu về ựộ vô trùng, có ựộ nhạy và ựộ ựặc hiệu tương ựương so với kháng nguyên của Anh và không có phản ứng chéo với kháng thể của các subtype: H4, H6, H7, H9.
3. Khi sử dụng kháng nguyên cúm A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 ựể xác ựịnh kháng thể cúm gia cầm cho kết quả không có sự sai khác so với kháng nguyên của Anh.
- Kháng nguyên cúm A/Vietnam/1203-H5N1 clade 1 bảo quản ở ựiều kiện -800C ựến tháng thứ 6 hiệu giá HA vẫn còn ựạt 9 log2.
5.2. đỀ NGHỊ
Nghiên cứu ựánh giá ựộ nhạy chẩn ựoán và ựộ ựặc hiệu chẩn ựoán của sản phẩm kháng nguyên cúm với lượng mẫu lớn hơn lấy từ thực ựịa, ựồng thời ựánh giá ựộ ổn ựịnh kháng nguyên cúm với thời gian bảo quản lâu hơn.
Sản phẩm có thể ựược nghiên cứu sản xuất số lượng lớn ựể cung cấp cho các phòng thắ nghiệm, thay thế cho việc nhập khẩu kháng nguyên từ nước ngoàị
TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT
1. Ban chỉ ựạo quốc gia phòng chống Cúm gia cầm (2005), ỘBáo cáo tổng kết công tác 2 năm (2004-2005) phòng chống dịch Cúm gia cầmỢ, Hội nghị tổng kết 2 năm phòng chống dịch cúm gia gà, ngày 18 tháng 4 năm 2005, Hà Nộị
2. Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn (2005), ỘKế hoạch dự phòng chống dịch Cúm gia cầm chủng ựộc lực cao tại Việt NamỢ, Hà Nộị
3. Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn (2005), ỘTiêu chuẩn ngành - Quy trình chẩn ựoán bệnh Cúm gia cầmỖỖ.
4. Bùi Quang Anh, Văn đăng Kỳ (2004), ỘBệnh Cúm gia cầm: lưu hành bệnh, chẩn ựoán và Kiểm soát dịch bệnhỢ, ỘKhoa học kỹ thuật thú y,
11(3), tr.63-69.
5. Ilaria capua, stefano Maragon (2004), ỘSử dụng tiêm chủng vaccine như một biện pháp khống chế cúm gàỢ, Khoa học kỹ thuật thú y, 11 (2), tr.59- 70.
6. Trần Hữu Cổn, Bùi Quang Anh, ỘBệnh Cúm gia cầm và biện pháp phòng
chốngỖỖ, NXB Nông Nghiệp Hà Nộị
7. Nguyễn Tiến Dũng, Malik Peiris, đào Thanh Vân, Bùi Ngọc Anh, Bùi
Nghĩa Vượng, Ngô Thanh Long (2004), ỘNguồn gốc virus Cúm gia cầm
H5N1 tại Việt Nam năm 2003-2004Ợ, Khoa học kỹ thuật thú y , 11(3), tr.1-6.
8. Nguyễn Tiến Dũng, đỗ Quắ Phương, đào Thanh Vân, Bùi Ngọc Anh, Bùi
Nghĩa Vượng, Nguyễn Thế Vinh, nguyễ Thúy Duyên, (2005), ỘGiám sát
bệnh Cúm gia cầm tại Thái BìnhỢ,Khoa học kỹ thuật thú y, 12(2), tr.6-12.
9. Trần Xuân Hạnh (2004), ỘMột vài vấn ựề trong phòng chống bệnh Cúm
10.Lê Văn Năm (2004), ỘKết quả khảo sát các biểu hiện lâm sàng và bệnh tắch ựại thể bệnh Cúm gia cầm ở một số cơ sở chăn nuôi các tỉnh phắa BắcỢ, Khoahọc kỹ thuật thú y, 11(3), tr.86-90.
11.Lê Văn Năm (2004), Ộ100 câu hỏi và ựáp quan trọng dành cho cán bộ thú y và người chăn nuôi gàỢ, NXB Nông Nghiệp Hà Nộị
12.Nguyễn Bá Thành (2005), ỘMột số ựặc ựiểm dịch tễ bệnh Gumboro trên ựàn gà tỉnh đồng NaiỢ, Khoa học kỹ thuật thú y, 11(3), tr.86-90.
13.Phạm Hùng Vân (2008), PCR và Real-time PCR Ộcác vấn ựề cơ băn và các ứng dụng thường gặpỢ, NXB Y học.
14.Tô Long Thành (2005), ỘKinh nghiệm phòng chống Cúm gia cầm và sử dụng vaccine Cúm gia cầm tại Trung QuốcỢ, khoa học kỹ thuật thú y, 12(3), tr.87-90.
15.Tô Long Thành, Nguyễn Hoàng đăng (2008), ỘKhảo sát ựáp ứng miễn dịch ở gia cầm ựã tiêm phòng vacxin cúm gia cầm trên ựịa bàn tỉnh Bắc Giang năm 2007-2008Ợ, khoa học kỹ thuật Thú ỵ Tập XV-Số 4, tr.96- 101.
16.Vũ Thị Mỹ Hạnh, Tô Long Thành và cộng sự (2008), ỘKiểm nghiệm vacxin Cúm gia cầm H5N1 của Trung Quốc sử dụng trong giai ựoạn 2006-2007ỖỖ, khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XV số 4 - 2008, tr.25 - 32. 17. Mary J. Pantin-Jackwood, Jenny Pfeiffer, Tô Long Thành, Nguyễn Tùng
và David Suarez (2008), Ộđộc tắnh của virus Cúm gia cầm thể ựộc lực cao H5N1 của Việt Nam trên gà và vịtỖỖ, Hội thảo quốc tế Nghiên cứu phục vụ hoạch ựịnh chắnh sách phòng chống Cúm gia cầm, 16 - 18/6/2008, Hà Nộị
18. D.L. Suarez và Mary Pantin-Jackwood (2008), ỘTiêm vacxin ựể khống chế bệnh Cúm gia cầm thể ựộc lực caoỢ, Hội thảo quốc tế Nghiên cứu phục vụ hoạch ựịnh chắnh sách phòng chống Cúm gia cầm, 16 - 18/6/200808, Hà Nộị
TRANG WEB
19. Các văn bản hướng dẫn sử dụng vaxcin Cúm gia cầm và giám sát sau