3.8.2.1. Dụng cụ và thiết bi
- Bộ điện di chứng
- Bộ nguồn chạy điện di (electrophoresis power supply) Biorad - Pipetteman 1000 µl. - Pipetteman 200 µl. - Pipetteman 10µl. - Típ xanh: 1 hộp. - Típ vàng: 1 hộp. - Típ trắng: 1 hộp. - Giấy lọc. - Giấy thấm. - Găng tay: 1 đôi. - Phao.
- Eppendorf. - pH kế 3.8.2.2. Hóa chất
- N, N, N’, N’-tetramethylenediamide [C6H16N2-TEMED] - Dung dịch Acryamide/Bisacryamide 40% (29:1) (3,3 % C)
- β-Mercaptoethanol [HSCH2CH2OH]
- Thang protein chuẩn SDS-PAGE (Bio-Rad), gồm các protein chuẩn có kích thước xác định sau:
• Phosphorylase b 97.400 Daltons
• Bovine serum albumin 66.200 Daltons
• Ovalbumin 45.000 Daltons
• Carbonic anhydrase 31.000 Daltons • Soybean trypsin inhibitor 21.500 Daltons
• Lysozyme 14.400 Daltons
- Sodium Dodecyl Sulfate [SDS]
- Ammonium persulfate [(NH4)2S2O8][APS]
- Coomassie Brillilant Blue G 250 dạng viên (Bio-Rad) - Cồn tuyệt đối [99,5 độ]
- Methanol [CH3OH]
- Tris (hydroxymethyl) aminomethane - Axit acetic
- Bromophenol blue - Glycerol [C3H8O3] - Glycine [C2H5O2N] - Axít Clohydric [HCl]
- Sodium dodecyl sulfate (SDS) 10%: cân 10g SDS cho 100ml nước cất vào khuấy cho tới khi tan hết.
- Dung dịch đệm gel phân tách (separating gel buffer) Tris-Cl 1.5 M, pH 8.8- 0,4% SDS: cân 36,3 g Tris pha thêm 100 ml nước cất thêm dần HCl 6 N và khuấy dung dịch trên cho tới khi pH kế chỉ 8.8. Hút 8 ml dung dịch SDS 10% cho vào. Thêm nước cất cho đủ 200 ml, lắc đều giữ ở 40 C.
- Dung dịch gel gom (stacking gel buffer) Tris-Cl 0,5M, pH 6.8-0,4% SDS: cân 6.05g Tris pha trong 100ml nước cất thêm dần HCl 6N và khuấy dung dịch trên cho tới khi pH kế chi 6.8. Hút 4ml dung dịch SDS 10% cho vào. Thêm nước cất cho đủ 100ml, lắc đều giữ ở 40 C.
- Ammoniumperslfate 10% (chỉ pha trước khi dùng): cân 0.1g cho vào một eppendorf 1000µl thêm 1ml nước cất, lắc đều, để ở nhiệt độ phòng.
- Dung dịch đệm điện di Tris-glycine pH 8.3: pha dung dịch me 10X chứa 30g Tris, 144g Glycine, 10g SDS hòa trong 1000ml nước cất.
- Dung dịch nạp mẫu 2X (2X treatment buffer) có thành phần như sau: 2.5ml dung dịch đệm Tris-Cl 0.5M, pH 6.8, 4ml 10% SDS, 2ml Glycerol, 2mg Bromophenol Blue, 0.2 ml mercaptoethanol, thêm nước đủ 10ml.
- Dung dịch nhuộm gel: chuẩn bị 250ml dung dịch nhuộm gel chứa 0.625g Coomassie Blue G 250, 112.5ml ethanol tuyệt đối, 112.5ml nước cất và 25ml axit acetic, lắc đều, giữ trong chai màu tối.
- Dung dịch giải nhuộm: 30ml methanol: 10ml acid acetic: 60ml nước cất.