Các hợp chất BM.02 05 đƣợc thử hoạt tính gây độc tế bào đối với bốn dòng ung thƣ KB (ung thƣ biểu mô), LU-1 (ung thƣ phổi ngƣời), LNCaP (ung thƣ tiền liệt tuyến) và HL-60 (ung thƣ máu cấp tính).
Thí nghiệm đƣợc lặp lại ba lần để đảm bảo tính chính xác của thí nghiệm và của dữ liệu. Sau quá trình xử lí số liệu bằng phần mềm Table Curve, các giá trị IC50
đã đƣợc tính toán và cho thấy độ tin cậy cao (r2 ≥ 0,99 tƣơng ứng sai số <0,01). Kết quả thu đƣợc nhƣ sau:
Bảng 3.6. Kết quả thử hoạt tính của các hợp chất đƣợc tách ra trên bốn dòng ung thƣ
Hợp chất Giá trị IC50 (g/ml)
trên bốn dòng tế bào ung thƣ khác nhau
HL-60 LU-1 KB LNCaP BM.02 > 20 > 20 > 20 > 20 BM.03 > 20 > 20 > 20 > 20 BM.04 > 20 > 20 > 20 > 20 BM.05 > 20 > 20 > 20 > 20 Ellipticine 0,66 0,72 0,89 0,697 .
Kết quả từ bảng 3.6 cho thấy các hợp chất đƣợc thử đều có hoạt tính trên tất cả các dòng nghiên cứu vì vậy có thể lựa chọn để tiến hành tìm hiểu hoạt tính sâu hơn nữa trên động vật và lâm sàng.
43
Bảng 3.7. Kết quả sàng lọc hoạt tính độc tế bào trên hai dòng tế bào LU và KB.
Mẫu LU KB OD trung bình % ức chế OD trung bình % ức chế MC 218 0.364 7.01 1.555 -3.04 MC 220 0.291 29.44 1.535 -1.64 MC 221 0.279 33.03 1.546 -2.43 Elipticine 0.063 99.39 0.091 99.23 DMSO 0.387 DMSO 1.512 O day 0.061 O day 0.080
Sau khi tiến hành sàng lọc trên hai dòng tế bào LU và KB chúng tôi nhận thấy hoạt tính của các chất không mạnh, điều này dễ hiểu và phù hợp với cấu trúc hóa học là những ancol mạch dài, chất béo của chúng.
44
KẾT LUẬN
1. Đã nghiên cứu thành phần hóa học của lá cây Brucea mollis (Wall. ex Kurz). Và đã phân lập đƣợc 5 hợp chất từ lá cây bao gồm: octatriacontan-1-ol (BM.01), tetratriacontan-1-ol (BM.02, MC218), stigmast-5,22-dien-3--ol (BM.03, 3R, 12K), bombiprenone (BM.04, MC220), α-tocopherol (BM.05, MC221). Trong đó, các hợp chất BM.01, BM.02, BM.04, BM.05 lần đầu tiên đƣợc phân lập từ chi Brucea. .
2. Đã đánh giá độc tính tế bào của dịch chiết MeOH tổng và các cặn chiết n-hexan, cloroform, dịch nƣớc từ lá cây Khổ sâm mềm đối với 3 chủng tế bào ung thƣ phổi ngƣời (Lu), ung thƣ gan ngƣời (Hep-G2) và ung thƣ vú (MCF-7). Dịch chiết MeOH cho tác dụng gây độc tế bào mạnh đối với dòng tế bào ung thƣ gan ngƣời Hep-G2 (IC50 =14,49 µg/ml). Cặn chiết n-hexan ức chế rất mạnh đối với cả ba dòng tế bào ung thƣ Lu, Hep-G2 và MCF-7 với giá trị IC50 (µg/ml) lần lƣợt là 3,5; 1,03; 5,8.
3. Đã nghiên cứu đánh giá hoạt tính gây độc tế bào các hợp chất phân lập đƣợc trên bốn dòng ung thƣ KB (ung thƣ biểu mô), LU-1 (ung thƣ phổi ngƣời), LNCaP (ung thƣ tiền liệt tuyến) và HL-60 (ung thƣ máu cấp tính). Các hợp chất phân lập đƣợc đều có hoạt tính nhƣng không mạnh.
45
DANH MỤC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ TRONG KHUÔN KHỔ LUẬN VĂN
1. Bùi Minh Nhuệ Mai Hùng Thanh Tùng, Hồ Việt Đức, Nguyễn Mạnh Cƣờng, Young Hoo Kim, Một số hợp chất béo và sterol phân lập từ cây Khổ sâm mềm (Brucea mollis), Tạp chí khoa học và công nghệ ( 5A), 2012..
46
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
1. Võ Văn Chi, Từ điển cây thuốc Việt Nam, Hà nội, NXB Y học, tr.1036 (1999). 2. Phạm Hoàng Hộ, Cây cỏ Việt Nam, NXB Trẻ (2000).
3. Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng, NXB Khoa học và kỹ thuật, Tập 2, Tr. 1286.
4. Đỗ Huy Bích và các cộng sự (2006), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, NXB Khoa học và kỹ thuật, Tập 1, tr. 542.
5. Đỗ Tất Lợi (2001), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB y học, Hà Nội, tr.142-143.
6. Nguyễn Nghĩa Thìn, Đỗ Thị Thu Hà (1998), Nghiên cứu thuốc dân tộc của đồng bào dân tộc Dao thôn Hợp nhất, xã Ba vì, tỉnh Hà tây, Tạp chí dược học, số 8, tr. 5-7.
7. Trần Đăng Thạch, Phạm Văn Cƣờng, Trần Hữu Giáp, Đoàn Thị Mai Hƣơng, Nguyễn Thị Minh Hằng, Marc Litaudon, Lê Văn Hạc, Nguyễn Văn Hùng, Châu Văn Minh (2010), Thành phần hóa học quả cây lãnh công lông mƣợt - Tạp chí KH&CN 48 (4A), 58-63.
8. Mai Hùng Thanh Tùng, Hồ Việt Đức, Trần thu Hƣờng, Nguyễn Mạnh Cƣờng, Các amít và flavonoit từ lá cây Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall.ex kurz), Tạp chí hóa học (2011).
9. Mai Hùng Thanh Tùng, Trần Thu Hƣờng, Nguyễn Mạnh Cƣờng,Trần Thế Bách, Nguyễn Quốc Bình (2011), tác dụng gây độc tế bào ung thƣ của lá cây Khổ sâm mềm (Brucea mollis), Tạp chí dƣợc liệu 16(6).
10. Mai Hùng Thanh Tùng, Hồ Việt Đức,Trần Thu Hƣờng, Nguyễn Mạnh Cƣờng, Các isoprenoit và coumarin từ cây Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall. ex Kurz), Tạp chí Khoa học và Công nghệ (2012)
11.Mai Hùng Thanh Tùng, Nguyễn Thành Dƣơng, Trần Thu Hƣờng, Nguyễn Mạnh Cƣờng, Các amít và flavonoit từ lá cây Khổ sâm mềm - Brucea mollis, Tạp chí hóa học (2011)
47
12. Mai Hùng Thanh Tùng, Hồ Việt Đức, Bùi Hữu Tài, Nguyễn Mạnh Cƣờng, Các tecpenoit và phenolic glucoside từ cây Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall. ex Kurz), Tạp chí hóa học (2011).
13. Mai Hùng Thanh Tùng, Hồ Việt Đức,Young Ho Kim, Nguyễn Mạnh Cƣờng, Đóng góp mới về nghiên cứu thành phần hóa học cây Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall. ex Kurz), Tạp chí hóa học.
Tiếng Anh
14. Nguyen Manh Cuong, Nguyen Hai Nam, Yong Kim, Young Jae You, KiHwan Bae, Tran Van Sung, and Byung Zun Ahn (2002), Cytotoxic Activity of Vietnamese Herbal Medicines against A549 Cells, Kor. J. Pharmacogn, 33(1), 64-68.
15. Hyuk Choi, Jungsug Gwak, Munju Cho, Min-Jung Ryu, Jee-Hyun Lee, Sang Kyum Kim, Young Ho Kim, Gye Won Lee, Mi-Young Yun, Nguyen Manh Cuong, Jae-Gook Shin, Gyu-Yong Song, Sangtaek Oh (2010), Murrayafolin A attenuates the Wnt/-catenin pathway by promoting the degradation of intracellular -catenin proteins, Biochemical and Biophysical Research Comunication, 391, 915-920.
16. Sheila m. Simão, Euclides L. Barreiros, M. Fatima Das G. F. Da Silva and Otto R. Gorrliebt (1991), Chemogeographical evolution of quassinoids in Simaroubaceae,
Phytochemistry, 30(3), 853-8651.
17. I. Kitagawa, T. Mahmud, P. Simanjuntak, K. Hori, T. Uji, H. Shibuya (1994), Indonesian medicinal plants. VIII. Chemical structures of three new triterpenoids, bruceajavanin A, dihydrobruceajavanin A, and bruceajavanin B, and a new alkaloidal glycoside, bruceacanthinoside, from the stems of Brucea javanica
(Simaroubaceae), Chem. Pharm. Bull., 42,1416-1421.
18. Ngo VT et al (1979), Effectiveness of Brucea sumatrana plant against malaria,
48
19. Christine Kamperdick, Tran Van Sung, Trinh Thi Thuy, Mai Van Tri and Günter Adam (1995), (20R)-O-(3)-α-L-arabinopyranosyl-pregn-5-en-3,20-diol from
Brucea javanica, Phytochemistry,38(3), 699 - 701.
20. Li Pan, Young-Won Chin, Hee-Byung Chai, Tran Ngoc Ninh, Djaja Djendoel Soejarto, A. Douglas Kinghorn (2009), Bioactivity-guided isolation of cytotoxic constituents of Brucea javanica collected in Vietnam, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 17, 2219-2224.
21. S. M. Kupchan, R.W. Britton, J. A. Lacadie, M. F. Ziegler, C. W. Sigel (1975), Tumor inhibitors. 100. Isolation and structural elucidation of bruceantin and bruceantinol, new potent antileukemic quassinoids from Brucea antidysenterica, J. Org. Chem., 40, 648-654.
22. T. Toyota, N. Fukamiya, M. Okano, K. Tagahara, J. J. Chang, K. H. Lee (1990), Antitumor Agents, 118. The isolation and characterization of bruceanic acid A, its methyl ester, and the new bruceanic acids B, C, and D, from Brucea antidysenterica, J. Nat. Prod., 53, 1526-1532.
23. M. Okano, N. Fukamiya, T. Aratani, M. Juichi, K. H. Lee (1985), Antitumor Agents, 74. Bruceanol-A and -B, two new antileukemic quassinoids from Brucea antidysenterica, J. Nat. Prod., 48, 972-975.
24. Narihiko F., Masayoshi O. (1988), Antitumor Agents, 93. Bruceanol C, a new cytotoxic quassinoid from Brucea antidysenterica, J. Nat. Prod., 51(2), 349-352. 25. K. Imamura, N. Fukamya, M. Okano, K. Tagahara, K. H. Lee (1993), Bruceanols
D, E, and F. Three new cytotoxic quassinoids from Brucea antidysenterica, J. Nat. Prod. , 56, 2091-2097.
26. K. Imamura, N. Fukamiya, M. Nakamura,M. Okano, K. Tagahara, K. H. Lee (1995), Bruceanols G and H, cytotoxic quassinoids from Brucea antidysenterica,
J. Nat. Prod., 58,1915-1919.
27. F. A. Darwish, F. J. Evans, J. D. Phillipson (1979), Cytotoxic bruceolides from
49
28. S. M. Kupchan, R.W. Britton, M. F. Ziegler, C.W. Sigel (1973), Bruceantin, a new potent antileukemic simaroubolide from Brucea antidysenterica, J. Org. Chem., 38, 178-179.
29. J. D. Phillipson, F. A. Darwish (1979), TLX-5 lymphoma cells in rapid screening for cytotoxicity in Brucea extracts, Planta Med., 35, 308.
30. M. J. O_Neill, D. H. Bray, P. Boardman, K. L. Chan, J. D. Phillipson, D. C. Warhurst, W. Peters (1987), Plants as sources of antimalarial drugs, Part 4: Activity of Brucea javanica fruits against chloroquine-resistant Plasmodium falciparum in vitro and against Plasmodium berghei in vivo, J. Nat. Prod., 50, 41-48.
31. H. Subeki, K. Matsuura, K. Takahashi, M. Nabeta, Y. Yamasaki, K. Maede, Katakura (2007), Screening of Indonesian medicinal plant extracts for antibabesial activity and isolation of new quassinoids from Brucea javanica, J. Nat. Prod., 70, 1654-1657.
32. M. Okano, K. H. Lee, I. H. Hall, F. E. Boettner (1981), Antitumor agents. 39. Bruceantinoside-A and -B, novel antileukemic quassinoid glucosides from
Brucea antidysenterica, J. Nat. Prod., 44, 470-474.
33. S. Rahman, N. Fukamiya, H. Tokuda, H. Nishino, K. Tagahara, K. H. Lee, M. Okano (1999), Three new quassinoid derivatives and related compounds as antitumor promoters from Brucea javanica, Bull. Chem. Soc. Jpn., 72, 751-756.
34. T. Sakaki, S. Yoshimura, T. Tsuyuki, T. Takahashi, T. Honda, Yadanzioside P (1986), A new antileukemic quassinoid glycoside from Brucea javanica (L.) Merr with the 3-O-(-D-Glucopyranosyl) bruceantin structure, Chem. Pharm. Bull., 34, 4447.
35. N. Fukamiya, M. Okano, K. Tagahara, T. Aratani, Y. Muramoto, K. H. Lee (1987), Antitumor agents, 90. Bruceantinoside C, a new cytotoxic quassinoid glycoside from Brucea antidysenterica, J. Nat. Prod., 50, 1075-1079.
36. J. Polonsky, Z. Baskevitch, A. Gaudemer, B. Das (1967), Consituants amers de
Brucea amarissima: structures des Bruceines A, B, et C, Experientia 23, 424- 426.
50
37. K. H. Lee, Y. Imakura, Y. Sumida, R. Y. Wu, I. H. Hall, H. C. Huang (1979), Antitumor agents. 33. Isolation and structural elucidation of bruceoside -A and - B, novel antileukemic quassinoid glycosides, and brucein -D and -E from Brucea javanica, J. Org. Chem., 44, 2180-2185.
38. J. Polonsky, Z. Baskevitch, J. Mueller (1969), Bitter components of Brucea amraissima. The structure of brucein F, C. R. Hebd, Seances Acad. Sci., 268, 1392-1395.
39. G. R. Duncan, D. B. Henderson (1968), Bruceins from Brucea sumatrana . The structure of brucein G, Experientia 24, 768-769.
40. K. H. Lee, Y. Imakura, H. C. Huang (1977), Bruceoside-A, a novel antileukaemic quassinoid glycoside from Brucea javanica, J. Chem. Soc., Chem. Commun., 2, 69-70.
41. N. Fukamiya, M. Okano, M. Miyamoto, K. Tagahara, K. H. Lee (1992), Antitumor agents, 127. Bruceoside C, a new cytotoxic quassinoid glucoside, and related compounds from Brucea javanica, J. Nat. Prod., 55, 468-475.
42. S. Ohnishi, N. Fukamiya, M. Okano, K. Tagahara, K. H. Lee (1995), Bruceosides D, E, and F, three new cytotoxic quassinoid glucosides from Brucea javanica, J. Nat. Prod., 58, 1032-1038.
43. N. Fukamiya, K. H. Lee, I. Muhammad, C. Murakami,M. Okano, I. Harvey, J. Pelletier (2005), Structure-activity relationships of quassinoids for eukaryotic protein synthesis, Cancer Lett., 220, 37.
44. K. Y. Sim, J. J. Sims, T. A. Geissman (1968), Constituents of Brucea sumatrana. I. Brusatol, J. Org. Chem., 33, 429-43.
45. J. D. Phillipson, F. A. Darwish (1981), Bruceolides from Fijian Brucea javanica,
Planta Med., 41, 209-220.
46. J. Polonsky, Z. Baskevitch-Varon, T. Sevenet (1975), Bitter constituents of
Soulamea tomentosa Simaroubaceae structure of a new quassinoid, iso-brucein A, Experientia, 31, 1113-1114.
51
47. I. H. Kim, R. Suzuki, Y. Hitotsuyanagi, K. Takeya (2003), Three novel quassinoids, javanicolides A and B, and javanicoside A, from seeds of Brucea javanica,Tetrahedron, 59, 9985-9989.
48. I. H. Kim, S. Takashima, Y. Hitotsuyanagi, T. Hasuda, K. Takeya (2004), New quassinoids, javanicolides C and D and javanicosides B−F, from seeds of Brucea javanica, J. Nat. Prod., 67, 863-868.
49. I. H. Kim, Y. Hitotsuyanagi, K. Takeya (2004), Quassinoid xylosides, javanicosides G and H, from seeds of Brucea javanica, Heterocycles, 63(3), 691- 697.
50. I. H. Kim, Y. Hitotsuyanagi, K. Takeya (2004), Quassinoid glucosides from seeds of Brucea amarissima, Phytochemistry, 65, 3167-3173.
51. J. S. Zhang, L. Lin, Z. L. Chen, R. S. Xu, X. Y. Sun (1983), Studies on
the chemical constituents of Brucea javanica. II. Brucein E-glucopyranoside,
Huaxue Xuebao, 41, 149-152.
52. B. N. Su, L. C. Chang, E. J. Park, M. Cuendet, B. D. Santarsiero, A. D. Mesecar, R. G. Mehta, H. H. S. Fong, J. M. Pezzuto, A. D. Kinghorn (2002), Bioactive constituents of the seeds of Brucea javanica, Planta Med., 68, 730-733.
53. T. Sakaki, S. Yoshimura, M. Ishibashi, T. Tsuyuki, T. Takahashi, T. Honda, T. Nakanishi (1984), New quassinoid glycosides, yadanziosides A-H, from Brucea javanica,Chem. Pharm. Bull., 32, 4702.
54. T. Sakaki, S. Yoshimura, M. Ishibashi, T. Tsuyuki, T. Takahashi, T. Honda, T. Nakanishi (1985), Constituents of seeds of Brucea javanica. Structures of new bitter principles, yadanziolides A, B, C, yadanziosides F, I, J, and L, Chem. Pharm. Bull., 58, 2673-2680.
55. T. Sakaki, S. Yoshimura, T. Tsuyuki, T. Takahashi, T. Honda, T. Nakanishi (1986), Structures of yadanziosides K, M, N, and O, new quassinoid glycosides from Brucea javanica (L.) Merr, Chem. Pharm. Bull., 59, 3541.
56. M. Okano, N. Fukamiya, T. Toyota, K. Tagahara, K. H. Lee (1989), Antitumor agents, 104. Isolation of yadanziosides M and P from Brucea antidysenterica and
52
identification of bruceantinoside B as a mixture of yadanzioside P and bruceantinoside C, J. Nat. Prod., 52, 398-401.
57. N. Fukamiya, M. Okano, T. Aratani, K. Negoro, A. T. McPhail, M. Juichi, K. H. Lee (1986), Antitumor agents, 79. Cytotoxic antileukemic alkaloids from Brucea antidysenterica, J. Nat. Prod., 49, 428-434.
58. N. Fukamiya, M. Okano, T. Aratani, K. Negoro, Y. M. Lin, K. H. Lee (1987), Antitumor agents. LXXXVII cytotoxic antileukemic canthin-6-one alkaloids from Brucea antidysenterica and the structure activity relationships of their derivatives, Planta Med., 53, 140-443.
59. Y. Ouyang, K. Mitsunaga, K. Koike, T. Ohmoto (1995), Alkaloids and quassinoids of Brucea mollis var. tonkinensis,Phytochemistry, 39, 911-913. 60. Y. Ouyang, K. Koike, T. Ohmoto (1994), Canthin-6-one alkaloids from Brucea
mollis var. tonkinensis, Phytochemistry, 36, 1543-1546.
61. Y. Ouyang, K. Mitsunaga, K. Koike, T. Ohmoto, (1994), Indole alkaloids from
Brucea mollis var. tonkinensis, Phytochemistry, 37, 575-578.
62. H. Schmid (1945), Über wasserlösliche Inhaltsstoffe von Papaver somniferum L,
Helv. Chim. Acta, 28, 722-740.
63. K. C. Liu, S. L. Yang, M. F. Roberts, J. D. Phillipson (1990), Cathin-6-one alkaloids from cell suspesion cultures of Brucea javanica, Phytochemistry, 29, 141-143.
64. S. Nakatsuka (1986), Structures of Flazin and Ys, hightly fluorescent compounds isolated from Japanese soy sauce, Tetrahedron Lett., 27, 3399-3402.
65. C. W. Wright, M. J. O_Neill, J. D. Phillipson, D. C. Warhurst (1988), Use of microdilution assess in vitro antiamoebic activities of Brucea javanica fruits,
Simarouba amara stem and a number of quassinoids, Antimicrob. Agents Chemother., 32, 1725-1729.
66. S. Rahman, N. Fukamiya, M. Okano, K. Tagahara, K. H. Lee (1997), Anti- tuberculosis activity of quassinoids.,Chem. Pharm. Bull., 45, 1527-1529.
53
67. Pierre A., Robert-Gero M., Tempete C., Polonsky J. (1980), Structural requirements of quassinoids for the inhibition of cell transformation, Biochem. Biophys. Res. Comm., 93, 675.
68. Jian-Hua Liu, Wei-Dong Zhang, Ski-Kai Yan, Yan-Heng Shen (2009), Chemical constituents of plants from the genus Brucea, Chemistry & Biodiversity, 6, 57-70. 69. Xiao-Hui Yan, Jia Chen, Ying-Tong Di, Xin Fang, Jia-Hong Dong, Peng Sang, Yue-Hu Wang, Hong- Ping He, Zhong-Kai Zhang, and Xiao-Jiang Hao (2010), Anti Tobacco Mosaic Virus (TMV) quassinoids from Brucea javanica (L.) Merr,
J. Agric. Food Chem., 58, 1572–1577.
70. Ajmi NoorShahida, Tin Wui Wong, Chee Yan Choo (2009), Hypoglycemic effect of quassinoids from Brucea javanica (L.) Merr (Simaroubaceae) seeds,
Journal of Ethnopharmacology, 124, 586–591.
71. Saw Bawm, Hideyuki Matsuura, Ahmed Elkhateeb, Kensuke Nabeta , Subeki, Nariaki Nonaka, Yuzaburo Oku, Ken Katakura (2008), In vitro antitrypanosomal activities of quassinoid compounds from the fruits of a medicinal plant, Brucea javanica, Veterinary Parasitology, 158, 288-294.
72. Chen Pangyu (1997), Simaroubaceae (excluding Harrisonia and Suriana), In: Chen Shukun, ed, Fl. Reipubl. Popularis Sin. 43(3), 10-13.
73. Alain Pierré, Malka Robert-Géro, Christiane Tempête and Judith Polonsky (1980), Structural requirements of quassinoids for the inhibition of cell transformation, Biochemical and biophysical research communications, 93, 3, 675-686.
74. Polonsky J. (1973), Quassinoit Bitter Principles, Fortschr Chem. Org. Naturst., 30, 101-50.
75. Polonsky, J. (1985), For reviews, Forts. Chem. Org. Naturst., 47, 221.
76. Grieco P. A., Vander-Roest J. M., Pineiro-Nunez M. M., Campaigne E. E., Carmack M. (1995), Polyandrol, a C19 quassinoit from Castela polyandra,
Phytochem., 38(6), 1463-1465.
77. Moretti C., Deharo E., Sauvain M., Jardel C., Timon David P., Gasquet (1994), Antimalarial activity of cedronin, J. Ethnopharm., 43, 57-61.
54
78. Clark E. P. (1937), Quassin. I. The preparation and purification of Quassin and Neoquassin, with information concerning their molecular formulas, J.Am. Chem. Soc., 59, 927.
79. Valenta Z., Papadopoulos S., Podesva (1961), Quassin and Neoquassin,
Tetrahedron, 15(1-4), 100-110.
80. Connolly J. D., Overton K. H., Polonsky J. (1970), The chemistry and