2.1 Nhiệm vụ của Luận văn
Cỏc hợp chất phenolic được phõn bố rộng rói trong giới thực vật. Chỳng cú ở nhiều bộ phận của cõy và là một phần khụng thể thiếu trong chế độ ăn uống của con người. Cỏc hợp chất phenolic gúp phần vào chất lượng dinh dưỡng và cảm quan của rau quả về màu sắc và mựi vị. Sự tiếp nhận cỏc hợp chất này là một yếu tố bảo vệ sức khỏe quan trọng. Cỏc hoạt chất này làm chậm lại hoặc kỡm hóm sự oxy húa lipid khi tỏc dụng như cỏc chất quột gốc tự do và do đú là cỏc chất chống oxi húa thiết yếu bảo vệ sự phỏt triển của mạch oxy húa. Bằng chứng cho vai trũ hạn chế cỏc bệnh suy thoỏi thần kinh của cỏc hợp chất phenolic đang xuất hiện. Cỏc nghiờn cứu in vivo trờn động vật thực nghiệm và in vitro trờn cỏc dũng tế bào ung thư đang chứng minh là cỏc polyphenol cú thể đúng vai trũ ngăn chặn ung thư và cỏc bệnh tim mạch khi được hấp thụ hàng ngày ở lượng thớch hợp.
Do cú nhiều tỏc dụng tớch cực đối với sức khỏe con người cũng như trong mối quan hệ sinh thỏi của thực vật với mụi trường xung quanh, cỏc hợp chất phenolic đó được quan tõm nghiờn cứu từ lõu trờn thế giới. Cõy Chẹo lỏ phong (Engelhardia spicata Lesch. ex Blume, Juglandaceae) là một cõy gỗ cao, mọc phổ biến ở nước ta và chưa được nghiờn cứu nhiều cho cỏc mục đớch ứng dụng. Lỏ cõy này đó được phỏt hiện cú chứa cỏc hợp chất phenolic trong một nghiờn cứu sàng lọc sắc ký cỏc loài thực vật Việt Nam. Để bước đầu đỏnh giỏ khả năng sử dụng cỏc hợp chất phenolic của loài cõy này mục tiờu của luận văn này là nghiờn cứu phõn lập cỏc hợp chất phenolic cú trong lỏ cõy Chẹo lỏ phong.
1) Xõy dựng quy trỡnh chiết và phõn lập cỏc hợp chất phenolic phõn cực từ lỏ cõy Chẹo lỏ phong;
2) Khảo sỏt sắc kớ lớp mỏng cỏc phần chiết chứa cỏc hợp chất phenolic nhận được.
Đỏnh giỏ định tớnh về sự phõn giải, khả năng phõn tỏch cỏc phần chiết và phõn lập cỏc hợp chất thành phần;
3) Xõy dựng quy trỡnh phõn tỏch cỏc phần chiết để phõn lập cỏc hợp chất phenolic
thành phần chớnh trong lỏ cõy Chẹo lỏ phong;
4) Xỏc định cấu trỳc cỏc hợp chất được phõn lập.
2.2 Phƣơng phỏp nghiờn cứu
2.2.1 Cỏc phƣơng phỏp phõn tớch, phõn tỏch cỏc hỗn hợp và phõn lập cỏc hợp chất chất
Cỏc phương phỏp sắc ký phõn tớch và điều chế sau đó được sử dụng trong Luận văn này:
1) Sắc kớ lớp mỏng (TLC) được sử dụng để phõn tớch định tớnh cỏc hỗn hợp chất, định hướng và kiểm tra cỏc quỏ trỡnh phõn tỏch và phõn lập sắc kớ.
2) Sắc kớ cột thường (CC) được thực hiện dưới trọng lực của dung mụi và được sử dụng để phõn tỏch cỏc phần chiết, phõn lập và tinh chế cỏc hợp chất thiờn nhiờn. Chất hấp phụ được dựng cho sắc ký cột là silica gel Merck (Darmstadt, CHLB Đức) theo cơ chế sắc ký hấp phụ.
3) Sắc ký cột (CC) gradient trờn pha đảo polyme cú kớch thước lỗ cao Dianion HP-20 được sử dụng để phõn tỏch cỏc hợp chất phõn cực trong phần chiết nước theo cơ chế sắc ký phõn bố.
4) Sắc ký cột (CC) trờn pha Sephadex LH-20 được sử dụng để phõn tỏch cỏc hợp chất
phenolic theo cơ chế sắc ký loại trừ theo kớch thước phõn tử. 5) Ph-ơng pháp kết tinh để phân lập và tinh chế các chất rắn.
Cấu trỳc của cỏc hợp chất được phõn lập được xỏc định bằng cỏch kết hợp cỏc phương phỏp vật lớ hiện đại:
1) Phổ khối lượng phun bụi điện tử (ESI-MS);
2) Phổ cộng hưởng từ hạt nhõn proton (1
H-NMR);
Chương 3