C: Mẫu chứng âm.
KIT HPV ĐỊNH TYPE
MƠ TẢ TĨM TẮT
Human Papillomavirus (HPV) là một nhĩm virus bao gồm hơn 100 kiểu gene (genotype - týp) khác nhau, trong đĩ khoảng 40 týp xâm nhiễm niêm mạc hậu mơn-sinh dục. HPV được phân thành hai nhĩm – “nguy cơ cao” và “nguy cơ thấp”. Sự nhiễm các týp “nguy cơ cao” ở bệnh nhân cĩ liên quan chặt chẽ với diễn tiến thành ung thư cổ tử cung. Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), ung thư cổ tử cung là nguyên nhân gây tử vong do ung thư đứng hàng thứ hai ở phụ nữ trên tồn thế giới. Xét nghiệm Pap, dùng trong tầm sốt ung thư cổ tử cung, chỉ phát hiện khoảng 80% trường hợp cĩ nguy cơ chuyển thành ung thư với một tỉ lệ kết quả “khơng kết luận được” khá lớn. Hơn nữa, xét nghiệm này khơng phân biệt được các type HPV. Những xét nghiệm dựa trên kỹ thuật sinh học phân tử sẽ giúp giải quyết được các vấn đề nêu trên.
Kit HPV PHÂN TYPE cho phép xác định chính xác các type HPV từ mẫu phết cổ tử cung dựa trên kỹ thuật REVERSE DOT BLOT. Trong phản ứng PCR, một cặp
mồi (primer) được sử dụng để nhân bản một trình tự cĩ kích thước 181 cặp base trên gene L1 của bộ gene HPV (trình tự mục tiêu). Sau đĩ sản phẩm PCR đánh dấu sẽ được lai phân tử với các mẫu dị đặc hiệu đặc hiệu cho các type HPV 6,11, 42, 43, 61, 70, 71, 81 (Low-risk) và HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 82 (High-risk) đã được cố định sẵn trên màng lai nylon. Tin hiệu dương tính được phát hiện thơng qua phản ứng tạo màu. Xét nghiệm bao gồm 4 bước : xử lý mẫu, tách chiết DNA, nhân bản và đánh dấu trình tự mục tiêu bằng PCR, phát hiện sản phẩm PCR dựa trên kỹ thuật REVERSE DOT BLOT. Kit HPV PHÂN TYPE dùng được cho 40 xét nghiệm với quy trình cho mỗi xét nghiệm kéo dài 7-8 giờ.
Kit này cĩ thể sử dụng phối hợp với kit HPV ĐỊNH TÍNH. Trong trường hợp đĩ, DNA từ mẫu đã được xác định là dương tính với kit HPV ĐỊNH TÍNH sẽ được tái nhân bản và phát hiện type HPV bằng kỹ thuật REVERSE DOT BLOT của kit này.
THAØNH PHẦN BỘ KIT 1. Hĩa chất xử lý mẫu 1. Hĩa chất xử lý mẫu
Que lấy mẫu 40 que
Oáng eppendorf 1,5 ml 40 ống Dung dịch E (Tris EDTA) 40 ml 2. Hĩa chất tách chiết DNA
Dung dịch 1 40 ml Dung dịch 2 10 ml Dung dịch 3 25 ml Dung dịch 4 45 ml Dung dịch 5 5 ml 3. Hĩa chất PCR-RDB
PCR-RDB Master mix (40 ul/eppendorf) 40 eppendorf 0,2 ml PCR master mix cho chứng dương 10 eppendorf 0,2 ml PCR master mix cho chứng âm 10 eppendorf 0,2 ml
Chứng dương (DNA HPV) 50 µl