4. ứng dụng sinh học phân tử trong xác định và nghiên cứu N.
4.3. Một số kỹ thuật sinh học phân tử khác đã và đang đ−ợc sử dụng rộng rãi trong xác định và nghiên cứu N gonorrhoeae
rộng rãi trong xác định và nghiên cứu N. gonorrhoeae
- Kỹ thuật điện di enzyme đa locus xác định sự biến đổi của các allen đối với các housekeeping enzyme trên nhiễm sắc thể.
- Phân tích plasmid
- Giải trình tự theo ph−ơng pháp của Sanger đối với các mảnh đa hình của gien porB.
- Xác định tính biến đổi về mặt di truyền bằng công nghệ pyrosequencing đối với các mảnh đa hình của gien porB.
- Kỹ thuật lai sử dụng các mẫu dò gắn biotin đối với các vùng hay biến đổi của gien porB.
- Xác định tính đa hình của độ dài các đoạn cắt của gien ARN ribosom cùng với việc xác định các mảnh bằng kỹ thuật lai các mẫu dò đặc hiệu của ARN ribosom.
- Kỹ thuật phân tích trình tự đa kháng nguyên của Neisseria
gonorrhoeae phân tích các mảnh của gien porB và gien qui định cho protein
B gắn chuyển sắt.
- Kỹ thuật PCR và cắt bằng enzyme hạn chế đói với gien opa.
- Xác định trình tự đa locus xác định tính đa hình của các allen ở một vài các housekeeping gene trên nhiễm sắc thể.
- Kỹ thuật định týp bằng phân tích các trình tự của các đoạn lặp lại của gien mã hoá cho lipoprotein màng ngoài.
- Phân tích đoạn cắt của ADN đ−ợc khuếch đại của ribosom - Phân tích tính đa hình của đoạn nucleotide đ−ợc khuếch đại - Định týp đoạn ADN đa hình đ−ợc khuếch đại ngẫu nhiên
- Phân tích toàn bộ gien của N. gonorrhoeae sau khi cắt liên tục bằng các enzyme hạn chế và điện di trên gel polyacrylamide.
- Phân tích toàn bộ gien của N. gonorrhoeae sau khi cắt bằng 100 enzyme hạn chế ít gặp sau đó phân tách các đoạn ADN bằng kỹ thuật điện di điện tr−ờng xung [14].
6. Kết luận
Các kỹ thuật sinh học phân tử ngày càng đóng vài trò quan trọng trong xác định và nghiên cứu N. gonorrhoeae. Các kỹ thuật này có độ nhạy, độ đặc
hiệu cao, tin cậy, và cho kết quả nhanh. Việc áp dụng các kỹ thuật này có ý nghĩa lớn trên thực tế lâm sàng, điều trị và nghiên cứu dịch tễ học.
Tài liệu tham khảo
1. Andersson, M., et al., Baculovirus-mediated gene transfer and recombinant
protein expression do not interfere with insulin dependent phosphorylation of PKB/Akt in human SHSY-5Y and C3A cells. BMC Cell Biol, 2007. 8: p. 6.
2. Andreu, A.L., et al., McArdle disease: molecular genetic update. Acta Myol,
2007. 26(1): p. 53-7.
3. Baffa, R., et al., Molecular genetics of bladder cancer: targets for diagnosis and
therapy. J Exp Clin Cancer Res, 2006. 25(2): p. 145-60.
4. Bruisten, S.M., et al., Multicenter validation of the cppB gene as a PCR target for
detection of Neisseria gonorrhoeae. J Clin Microbiol, 2004. 42(9): p. 4332-4.
5. Burkitt, K. and M. Ljungman, Phenylbutyrate interferes with the Fanconi anemia
and BRCA pathway and sensitizes head and neck cancer cells to cisplatin. Mol
Cancer, 2008. 7(1): p. 24.
6. Chapin, K.C., Molecular tests for detection of the sexually-transmitted pathogens
Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis. Med Health R I, 2006. 89(6): p. 202-4.
7. Chen, Z., et al., Expression, purification, and characterization of secreted
recombinant human insulin-like growth factor-binding protein-6 in methylotrophic yeast Pichia pastoris. Protein Expr Purif, 2007. 52(2): p. 239-48.
8. Chernesky, M.A. and D.E. Jang, APTIMA transcription-mediated amplification
assays for Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae. Expert Rev Mol
Diagn, 2006. 6(4): p. 519-25.
9. Cook, R.L., et al., Systematic review: noninvasive testing for Chlamydia
trachomatis and Neisseria gonorrhoeae. Ann Intern Med, 2005. 142(11): p. 914- 25.
10. da Cunha Mde, L., R.A. Calsolari, and J.P. Junior, Detection of enterotoxin and
toxic shock syndrome toxin 1 genes in Staphylococcus, with emphasis on coagulase-negative staphylococci. Microbiol Immunol, 2007. 51(4): p. 381-90.
11. Dieu, B.T., et al., Molecular epidemiology of white spot syndrome virus within
Vietnam. J Gen Virol, 2004. 85(Pt 12): p. 3607-18.
12. Espinosa de los Monteros, L.E., [Polymerase chain reaction (PCR) in clinical
diagnosis. Review of the use of the technique]. Rev Latinoam Microbiol, 1993.
35(2): p. 225-30.
13. Farrell, D.J., Evaluation of AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae PCR using cppB
nested PCR and 16S rRNA PCR. J Clin Microbiol, 1999. 37(2): p. 386-90.
14. Fredlund, H., et al., Molecular genetic methods for diagnosis and
characterisation of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae: impact on epidemiological surveillance and interventions. Apmis, 2004. 112(11-12): p. 771-84.
15. Galluzzi, L., et al., Current molecular techniques for the detection of microbial
pathogens. Sci Prog, 2007. 90(Pt 1): p. 29-50.
16. Gunawardana, G.A., K.M. Townsend, and A.J. Frost, Molecular characterisation
of avian Pasteurella multocida isolates from Australia and Vietnam by REP-PCR and PFGE. Vet Microbiol, 2000. 72(1-2): p. 97-109.