4. ứng dụng sinh học phân tử trong xác định và nghiên cứu N.
4.1. Kỹ thuật la
Các mẫu dò đặc hiệu lai trực tiếp với đoạn acid nucleic của N. gonorrhoeae
có mặt trong bệnh phẩm. Tuy nhiên, một số nghiên cứu cho thấy, kỹ thụât này có độ nhạy và độ đặc hiệu có khi thấp hơn so với kỹ thuật nuôi cấy, phân lập thông th−ờng [44].
Kỹ thụât lai ADN sử dụng các mẫu dò ADN là một ph−ơng tiện có hiệu quả để xác định vi khuẩn lậu trong các bệnh phẩm từ đ−ờng sinh dục, tiết niệu. Các kỹ thuật này đã đ−ợc dùng rộng rãi trong nhiều năm gần đây. Các mẫu dò sử dụng trình tự các nucleotide của các gien qui định cho đặc điểm cấu trúc, chuyển hoá của vi khuẩn cũng đã đ−ợc nghiên cứu và áp dụng nh− gien cho enzyme phân huỷ protein IgAl, RNA của ribosom, hay plasmid…. Một số gien qui định cho các pili của N. gonorrhoeae có hơn 1 bản copy và rất giống với các gien này của Não mô cầu. Tất cả các N. gonorrhoeae đều có một bản copy của gien qui định enzyme phân huỷ protein IgA1, tuy nhiên,việc phát hiện gien này không phải dễ dàng khi mà trong bệnh phẩm chỉ có một ít vi khuẩn. Ng−ời ta cũng đã nghiên cứu các mẫu dò từ các RNA của ribosom của các vùng khác nhau trên tiểu phẩn 16S . Kết quả cho thấy, độ nhạy và độ đặc hiệu của nó đạt tới gần 100% [6, 14, 17, 44].
Các chủng N. gonorrhoeae có một vài plasmid. Những plasmid nhỏ, kích th−ớc khoảng 2-4 Kb có mặt ở khoảng 96% tổng số chủng. Tuy nhiên, nhiều plasmid ng−ời ta vẫn ch−a biết hết chức năng. Việc sử dụng các mẫu dò từ các plasmid này có nhiều hạn chế trong việc phát hiện N. gonorrhoeae trên lâm sàng. Gần đây, một số nghiên cứu cho thấy, sản phẩm polypeptide của gen cppB của plasmid pJD đ−ợc tạo ra từ một số chủng vi khuẩn lậu và một bản copy của gien này cũng có mặt trên nhiễm sắc thể của các chủng đ−ợc nghiên cứu [4, 13, 41].
Tuy nhiên, một số tác giả cũng nhấn mạnh rằng, việc có sự kết hợp chéo giữa các trình tự của N. gonorrhoeae với N. meningitidis và N. lactamica là có thể xảy ra. Trong nhiều tr−ờng hợp, do số l−ợng bản copy thấp nên kỹ thuật PCR là cần thiết để có thể xác định sự có mặt của đoạn nucleotide cần quan tâm vì về mặt lý thuyết, chỉ cần 1 bản copy của đoạn nucleotide là kỹ thuật này có thể phát hiện đ−ợc.
Một số test dựa trên kỹ thụât lai dùng trong xác định và nghiên cứu N. gonorrhoeae đã đ−ợc nghiên cứu và phát triển nh− PACE 2 assay (Gen- Probe) đã đ−ợc dùng để phát hiện 16S rRNA của N. gonorrhoeae, Hybrid Capture 2 (HC2) CT/GC bao gồm HC2 GC-ID cho N. gonorrhoeae (Digene Corporation) là một kỹ thuật lai ARN xác định những trình tự ADN đặc hiệu trên nhiễm sắc thể và plasmid của vi khuẩn này [14]. Nhìn chung, kỹ thuật lai có độ đặc hiệu cao nh−ng có độ nhạy thấp. Chính vì vậy, kỹ thuật khuếch đại acid nucleic-PCR đã đ−ợc nghiên cứu và phát triển trong việc xác định và nghiên cứu N. gonorrhoeae.
Hình…: Một số bộ kit đã đ−ợc th−ơng mại hoá dùng trong xác định và nghiên cứu N. gonorrhoeae [44].