ĐỐI TƯỢNG & PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.2.1.Phương phỏp nghiờn cứu tớnh an toàn của cream SL1:
* Phương phỏp xỏc định độc tớnh cấp của cream SL1
Theo phương phỏp của P.Z. Livschitch (1986) cú cải tiến:
+ Chia ngẫu nhiờn 60 chuột thớ nghiệm thành 6 lụ, mỗi lụ 10 con. + Lụ số 1 là lụ chứng; Từ lụ thứ 2 đến lụ thứ 6 là lụ thớ nghiệm.
+ Cho chuột uống cream SL1 bằng bơm đầu tự, một lần duy nhất trong ngày theo cỏc liều khỏc nhau cho 5 lụ chuột (từ lụ 2 đến lụ 6). Theo dừi tỷ lệ chuột sống/chết trong 72 giờ.
+ Nhúm đối chứng (lụ 1) cho uống nước cất tương tự như trờn.
Độc tớnh cấp diễn được xỏc định qua liều gõy chết 50% số chuột nhắt trắng. Sau khi cho chuột thớ nghiệm uống thuốc NC với liều tăng dần (liều tối đa mà chuột cú thể uống được) tới khi đạt được số chuột chết 100%. Mức liều thuốc uống tớnh bằng g/kg thể trọng chuột.
* Phương phỏp xỏc định độc tớnh bỏn cấp của cream SL1 [5], [10],[69].
+ Chuột ở lụ thớ nghiệm được uống cream SL1 theo cỏc liều khỏc nhau, mỗi ngày một lần, trong 7 ngày. Theo dừi tỷ lệ sống/chết của chuột thớ nghiệm trong 12 ngày (7 ngày trong quỏ trỡnh gõy độc và 5 ngày sau khi gõy độc).
+ Nhúm đối chứng (một lụ) cho chuột uống nước cất tương tự như trờn. Tớnh toỏn kết quả theo trọng lượng thụ của thuốc.
* Phương phỏp nghiờn cứu độc tớnh bỏn trường diễn của cream SL1 bằng đường uống
Theo phương phỏp của Abrham W.B.và Tuner A .
+ Chia chuột thớ nghiệm ra làm 2 lụ, mỗi lụ 10 con:
- Lụ thớ nghiệm: Đưa cream SL1 với liều 50g/kg thể trọng (tương đương với 0,1 ml SL1 cho 1 chuột nặng 20 g) vào đường tiờu hoỏ bằng bơm tiờm đầu tự, hàng ngày, liờn tục trong 8 tuần.
- Lụ chứng: Sử dụng dung dịch nước muối sinh lý 0,9% 0,1ml cho chuột mỗi ngày bằng cỏch tương tự như lụ thử.
Động vật thớ nghiệm được nuụi dưỡng trong cựng một điều kiện và cựng một chế độ dinh dưỡng.
+ Theo dừi đỏnh giỏ:
- Biểu hiện chung: Theo dừi hàng ngày về mức độ tiờu thụ thức ăn, hành vi, khả năng hoạt động, tỡnh trạng phừn, lụng.
- Theo dừi hàng tuần về trọng lượng cơ thể. - Cỏc chỉ số huyết học:
. Thời điểm xột nghiệm: xuất phỏt điểm, tuần thứ IV, tuần thứ VIII. - Chức năng gan, thận:
. Xột nghiệm xỏc định enzym GOT, GPT huyết thanh. . Xột nghiệm hàm lượng creatinin.
. Thời điểm xột nghiệm: tuần thứ VIII. - Xột nghiệm hỡnh ảnh giải phẫu bệnh lý:
. Gan . Thận
* Phương phỏp nghiờn cứu độc tớnh bỏn trường diễn của cream SL1 trờn da thỏ
+ Gồm 14 thỏ, chia làm 2 lụ (lụ thớ nghiệm và lụ chứng), mỗi lụ 7 con: Thỏ được cạo sạch lụng ở cỏc vị trớ: 2 đựi, lưng với đường kớnh 7 cm.
- Lụ thớ nghiệm: Bụi cream SL1.
- Lụ chứng: Bụi nước muối sinh lý 0,9%.
- Vị trớ bụi: Bụi cream SL1 vào 2 đựi và lưng, bụi thành hỡnh trũn đường kớnh 5 cm.
- Cỏch bụi: Dựng tampon bụi cream SL1 vừa đủ một lớp mỏng trờn da ở 3 vị trớ như trờn, ngày bụi một lần vào buổi sỏng, trong 8 tuần liờn tục.
Thỏ được nuụi dưỡng trong cựng một điều kiện và cựng một chế độ dinh dưỡng.
+ Chỉ tiờu theo dừi:
. Toàn thõn: Theo dừi hàng ngày về mức độ tiờu thụ thức ăn, hành vi, khả năng hoạt động, tỡnh trạng phừn, lụng. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
. Tại chỗ: Theo dừi mức độ phản ứng của da.
- Trọng lượng cơ thể:Theo dừi hàng tuần về trọng lượng cơ thể. - Cỏc chỉ số huyết học:
. Số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, hàm lượng hemoglobin. . Thời điểm xột nghiệm: Xuất phỏt điểm, tuần thứ IV, tuần thứ VIII. - Chức năng gan, thận:
. Xột nghiệm hoạt độ enzym GOT, GPT, huyết thanh. . Xột nghiệm hàm lượng creatinin.
. Thời điểm xột nghiệm: Tuần thứ VIII. - Xột nghiệm giải phẫu bệnh lý:
. Gan . Thận
Cỏch lấy mẫu và chuẩn bị mẫu thử: Xỏc định hoạt độ enzym GOT, GPT, hàm lượng Ure, Creatinin huyết thanh và cỏc thành phần huyết học trong mỏu. Tiến hành bằng cỏch lấy mỏu ở tĩnh mạch tai thỏ vào buổi sỏng lỳc đúi vào cỏc thời điểm đó xỏc định để làm xột nghiệm:
+ Phương phỏp xỏc định hoạt độ enzym GOT trong huyết thanh theo Bergmeger H. U. và CS 1986.
+ Xỏc định số lượng HC, BC và hàm lượng Hemoglobin được tiến hành theo phương phỏp thường quy làm trờn mỏy Hemacell Plus của hóng VIFACO (Phỏp). Nghiờn cứu tớnh an toàn trờn thực nghiệm được thực hiện tại bộ mụn độc học HVQY.