.K THU TăTESTăSINHăHịAă NH DANH[2,16,24,25]

Một phần của tài liệu Khảo sát tính đề kháng kháng sinh của Escherichia Coli được phân lập từ các mẫu bệnh phẩm máu và nước tiểu tại Bệnh viện Nhi Đồng 2 từ tháng 11 năm 2013 đến tháng 04 năm 2014 (Trang 55)

Hút 10ml n c mu i sinh lý cho vào tube vô trùng.

Ch n khu n l c đ c tr ng c a t ng loài vi khu n, dùng pipet l y 3-4 khu n l c đ c tr ng c đ

Trên BA, vi khu n m c m nh t o khu n l c tròn, to, màu

tr ngăđ c, bóng, l i

Trên Select URI 4 vi khu n m c thành các khu n l c tròn,

to,ămƠuăđ h ng, bóng l i

Hình 2.5: K t qu nuôi c y phân l p E.coli trên

Hình 2.6: Ph n ng KIA

Hình 2.7: Ph n ng Manitol.

VI.1. KIA

Xác đ nh kh n ng lên men đ ng glucose ho c đ ng lactose , kh n ng sinh h i hay sinh H2S

VI.1.1. Ti n hành

- Cho m t gi t vi khu n vào ng th ch bán nghiêng, sau đó dùng pipet c m th ng xu ng b m t th ch v i đ sâu b ng 2/3 môi tr ng trong

ng.

- yn p ngnghi m nh ng không đ ych t.

VI.1.2. c k t qu

- /vàng (ki m/acid): ch lên men đ ng glucose.

- Vàng/vàng (acid/acid) lên men glucose và lactose.

- Môi tr ng v n đ , ph n trên b m t đ đ m h n so v i s bi n d ng peptone: không lên men glucose và lactose.

- N u trong ng nghi m có k t t a màu đen: có kh n ng sinh H2S.

- N u th ch b chia c t ho c b đ y lên kh i đáy ng nghi m: có sinh khí trong quá trình lên men đ ng.

VI.2. Lên men mannitol

Xác đ nh kh n ng c a m t vi sinh v t lên men manitol, đ ng th i xem kh n ng di đ ngc a vi sinh v t.

VI.2.1. Ti n hành

- Hút huy n d ch vi khu n vào pipet. C m th ng pipet vào v i đ sâu b ng 2/3 môi tr ng trong ng nghi m. L u ý không nh lên b m tth ch tránh t ng di đ nggi .

- yn p ngnghi m nh ng không đ ych t.

VI.2.2. c k t qu

Hình 2.8: Ph n ng Citrate

- (-): môi tr ng gi nguyên màu đ ban đ u, không lên men manitol.

- Có hi n t ng lan ra kh iđ ng c y, xa hay g n tùy theo kh n ng di đ ngc a vi sinh v tm nh hay y u, có th làm đ c môi tr ng: có kh n ng di đ ng.

VI.3. Citrate

Th nghi m citrate là m t trong nh ng th nghi m dùng đ phân bi t các nhóm lòai vi khu n: nhóm K. (+), Enterobacter (+), v i E. coli (-), ho c đ phân bi t Edwardsiella (-) v i Salmonella (+).

VI.3.1. Ti n hành

- Hút huy n d ch vi khu n vào pipet nh lên b m t ng th ch nghiêng. y n p ng nghi m nh ng không đ y ch t.

VI.3.2. c k t qu

- (+): chuy n t màu l c sang màu xanh d ng, có s d ng citrate.

- (-): v n gi nguyên màu l c, không s d ng citrate.

VI.4. Th nghi m decarboxylase

Có 3 th nghi m quan tr ng:

- ADC (th nghi m arginine decarboxylase)/ADH (th nghi m arginine dehydrolase).

- LDC (th nghi m Lysin decarboxylase).

- ODC (th nghi m Ornithine decarboxylase).

Các th nghi m decarboxylase dùng đ phân l ai và đ nh danh các l ai vi khu n thu c h đ ng ru t Enterobacteriacea.

Hình 2.9: Ph n ng decarboxylase

- Dùng pipet hút huy n d ch vi khu n nh vào ng nghi m ch a l n l t các môi tr ng ADH, LDC, ODC.

- Nh d u parafin vào ng nghi m.

- y n p ng nghi m nh ng không đ y ch t.

- 370C, 18/24h.

VI.4.2. c k t qu

- (+): vi sinh v t m c, môi tr ng màu tím,đ c h n.

- (-): vi khu n m c, môi tr ng chuy n sang màu vàng hay vi khu n không m c, môi tr ng gi nguyên màu tím ban đ u.

VI.5. Urease_ Indol

Th nghi m Urease- Indole là m t trong nh ng th nghi m c n cho xác đ nh nhóm loài vi khu n.

Th nghi m Urease: là đ c tr ng cho các loài Proteus spp và th ng đ c dùng đ phân bi t các d ng Proteus v i các vi khu n khác c a Enterobacteriacea.

Th nghi m indole: đ c dùng đ phân bi t E. coli (+) v i Klebsiella (-), Proteus(-) v i các l ai Proteus khác (+).

VI.5.1. Ti n hành

- B sung 2-3 ml dung d ch ure-phenol, pHả7,2.

- 370C, 18-24h.

VI.5.2. c k t qu

 Th nghi m Ure:

- (+): phenol red chuy n t đ sang h ng cánh sen.

- (-): không đ i màu.

Hình 2.10: Ph n ng ure

 h nghi m Indol.

- (+): xu t hi n màu đ trên b m t môi tr ng.

- (-): xu t hi n màu vàng trên b m t môi tr ng.

Hình 2.12:K t qu testăsinhăhóaăđnh danh E.coli

T trái sang ph i: ng KIA: lên men gluocose, lactose, sinh h i, không sinh H2S; ng Manitol (+); ng Citrate (-); ng ADH (-); ng LDC (+); ng ODC (+); ng Ure (-); Indol (+)

VII. K THU Tă XỄCă NHă NH Y C M KHÁNG SINH C A E.COLI[16,17,24,25]

VII.1. Nguyên t c

Kháng sinh đ c t m vào đ a gi y theo n ng đ cho t ng lo i. Kháng sinh s khu ch tán chung quanh m t th ch môi tr ng nuôi c y. ng kính vòng vô khu n b c ch di n đ t tính nh y c m c a vi khu n đ i v i kháng sinh.

VII.2. Cách ti n hành VII.2.1. Chu n b v t li u

- V t li u: đ a kháng sinh c a hãng Biorad.

- a kháng sinh là nh ng đ a gi y có đ ng kính 6mm đ c t m dung d ch kháng sinh v i n ng đ tiêu chu n.

- Các tiêu chu n chính đ l a ch n kháng sinh:

- Ch n kháng sinh đ i di n cho nhóm có cùng ph ho t đ ng.

- Tùy thu c vào lo i vi khu n th nghi m.

- Tùy thu c vào v trí nhi m khu n.

- Tùy theo chi n l c và chính sách s d ng kháng sinh t ng vùng, t ng đ a ph ng.

- Môi tr ng th c hi n kháng sinh đ :

- Th ch Mueller Hinton (MHA) c a hãng Biorad là môi tr ng t t nh t đ th c hi n kháng sinh đ th ng qui (đ i v i vi khu n d m c). Môi tr ng đ c b o qu n trong t l nh, tr c khi dùng ph i t m 370C trong vòng 2 – 3 gi .

VII.2.2. Chu n b huy n d ch vi khu n

- Pha huy n d ch vi khu n có n ng đ 0,5 McFarland. Huy n d ch vi khu n nh v y ch a 1-2×108t bào/ml.

- Trên m t th ch phân l p thu n khi t, ch n ít nh t 3 – 5 khóm vi khu n đi n hình cho vào trong n c mu i sinh lý NaCl 0,85 %. l c đ u b ng máy l c. i u ch nh huy n d ch vi khu n đ t đ đ c chu n 0.5 McFarland.

- So sánh đ đ c chu n MC Farland 0,5 ml ta đ c h n h p d ch vi khu n ch a 108 CFU/ml.

VII.2.3. Cácăb c ti n hành

Trong vòng 15’ sau khi pha huy n dich vi khu n ti n hành tràn d ch khu n trên m t th ch.

Các b c ti n hành nh sau

- L c đ u ng nghi m ch a huy n d ch vi khu n.

- Hé m n p h p, h l a ng nghi m, đ huy n d ch vào h p.

- L c nh h p th ch đ huy n dch tràn đ u m t th ch. Sau đó rút h t l ng huy n dch trong đó ra, đ h p th ch khô.

- t đ a kháng sinh theo t ng lo i vi khu n lên m t th ch đư tr i huy n d ch vi khu n sao cho m t c a khoanh gi y áp sát vào m t c a môi tr ng, mép ngoài khoanh gi y cách thành trong c a đ a kho ng 15mm và khoanh n cách khoanh kia 20mm, đ yên trong vòng 15 phút, sau đó đem s p h p th ch trong t m 370C.

VII.2.4. c và bi n lu n k t qu

- Sau khi 24 gi , vi khu n s m c thành nh ng khóm m n ti p h p nhau và vòng vô khu n s là m t vòng tròn đ ng nh t.. N u vi khu n m c thành nh ng khóm riêng l thì m m c y quá loãng, ph i làm l i th nghi m.

- o đ ng kính vòng vô khu n phía sau c a đ a th ch b ng th c có đ n v là mm, b ng compa tr t hay th c k tr t.

- ánh giá k t qu đ ng kính vòng vô khu n đo đ c đ i chi u v i b ng gi i h n đ ng kính vòng c ch cho t ng lo i vi khu n d a theo tiêu chu n NCCLS và ghi nh n k t qu vi khu n nh y c m hay trung gian hay kháng đ i v i kháng sinh th nghi m.

Một phần của tài liệu Khảo sát tính đề kháng kháng sinh của Escherichia Coli được phân lập từ các mẫu bệnh phẩm máu và nước tiểu tại Bệnh viện Nhi Đồng 2 từ tháng 11 năm 2013 đến tháng 04 năm 2014 (Trang 55)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(102 trang)