Hút 10ml n c mu i sinh lý cho vào tube vô trùng.
Ch n khu n l c đ c tr ng c a t ng loài vi khu n, dùng pipet l y 3-4 khu n l c đ c tr ng c đ
Trên BA, vi khu n m c m nh t o khu n l c tròn, to, màu
tr ngăđ c, bóng, l i
Trên Select URI 4 vi khu n m c thành các khu n l c tròn,
to,ămƠuăđ h ng, bóng l i
Hình 2.5: K t qu nuôi c y phân l p E.coli trên
Hình 2.6: Ph n ng KIA
Hình 2.7: Ph n ng Manitol.
VI.1. KIA
Xác đ nh kh n ng lên men đ ng glucose ho c đ ng lactose , kh n ng sinh h i hay sinh H2S
VI.1.1. Ti n hành
- Cho m t gi t vi khu n vào ng th ch bán nghiêng, sau đó dùng pipet c m th ng xu ng b m t th ch v i đ sâu b ng 2/3 môi tr ng trong
ng.
- yn p ngnghi m nh ng không đ ych t.
VI.1.2. c k t qu
- /vàng (ki m/acid): ch lên men đ ng glucose.
- Vàng/vàng (acid/acid) lên men glucose và lactose.
- Môi tr ng v n đ , ph n trên b m t đ đ m h n so v i s bi n d ng peptone: không lên men glucose và lactose.
- N u trong ng nghi m có k t t a màu đen: có kh n ng sinh H2S.
- N u th ch b chia c t ho c b đ y lên kh i đáy ng nghi m: có sinh khí trong quá trình lên men đ ng.
VI.2. Lên men mannitol
Xác đ nh kh n ng c a m t vi sinh v t lên men manitol, đ ng th i xem kh n ng di đ ngc a vi sinh v t.
VI.2.1. Ti n hành
- Hút huy n d ch vi khu n vào pipet. C m th ng pipet vào v i đ sâu b ng 2/3 môi tr ng trong ng nghi m. L u ý không nh lên b m tth ch tránh t ng di đ nggi .
- yn p ngnghi m nh ng không đ ych t.
VI.2.2. c k t qu
Hình 2.8: Ph n ng Citrate
- (-): môi tr ng gi nguyên màu đ ban đ u, không lên men manitol.
- Có hi n t ng lan ra kh iđ ng c y, xa hay g n tùy theo kh n ng di đ ngc a vi sinh v tm nh hay y u, có th làm đ c môi tr ng: có kh n ng di đ ng.
VI.3. Citrate (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Th nghi m citrate là m t trong nh ng th nghi m dùng đ phân bi t các nhóm lòai vi khu n: nhóm K. (+), Enterobacter (+), v i E. coli (-), ho c đ phân bi t Edwardsiella (-) v i Salmonella (+).
VI.3.1. Ti n hành
- Hút huy n d ch vi khu n vào pipet nh lên b m t ng th ch nghiêng. y n p ng nghi m nh ng không đ y ch t.
VI.3.2. c k t qu
- (+): chuy n t màu l c sang màu xanh d ng, có s d ng citrate.
- (-): v n gi nguyên màu l c, không s d ng citrate.
VI.4. Th nghi m decarboxylase
Có 3 th nghi m quan tr ng:
- ADC (th nghi m arginine decarboxylase)/ADH (th nghi m arginine dehydrolase).
- LDC (th nghi m Lysin decarboxylase).
- ODC (th nghi m Ornithine decarboxylase).
Các th nghi m decarboxylase dùng đ phân l ai và đ nh danh các l ai vi khu n thu c h đ ng ru t Enterobacteriacea.
Hình 2.9: Ph n ng decarboxylase
- Dùng pipet hút huy n d ch vi khu n nh vào ng nghi m ch a l n l t các môi tr ng ADH, LDC, ODC.
- Nh d u parafin vào ng nghi m.
- y n p ng nghi m nh ng không đ y ch t.
- 370C, 18/24h.
VI.4.2. c k t qu
- (+): vi sinh v t m c, môi tr ng màu tím,đ c h n.
- (-): vi khu n m c, môi tr ng chuy n sang màu vàng hay vi khu n không m c, môi tr ng gi nguyên màu tím ban đ u.
VI.5. Urease_ Indol
Th nghi m Urease- Indole là m t trong nh ng th nghi m c n cho xác đ nh nhóm loài vi khu n.
Th nghi m Urease: là đ c tr ng cho các loài Proteus spp và th ng đ c dùng đ phân bi t các d ng Proteus v i các vi khu n khác c a Enterobacteriacea.
Th nghi m indole: đ c dùng đ phân bi t E. coli (+) v i Klebsiella (-), Proteus(-) v i các l ai Proteus khác (+).
VI.5.1. Ti n hành
- B sung 2-3 ml dung d ch ure-phenol, pHả7,2.
- 370C, 18-24h.
VI.5.2. c k t qu
Th nghi m Ure:
- (+): phenol red chuy n t đ sang h ng cánh sen. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- (-): không đ i màu.
Hình 2.10: Ph n ng ure
h nghi m Indol.
- (+): xu t hi n màu đ trên b m t môi tr ng.
- (-): xu t hi n màu vàng trên b m t môi tr ng.
Hình 2.12:K t qu testăsinhăhóaăđnh danh E.coli
T trái sang ph i: ng KIA: lên men gluocose, lactose, sinh h i, không sinh H2S; ng Manitol (+); ng Citrate (-); ng ADH (-); ng LDC (+); ng ODC (+); ng Ure (-); Indol (+)
VII. K THU Tă XỄCă NHă NH Y C M KHÁNG SINH C A E.COLI[16,17,24,25]
VII.1. Nguyên t c
Kháng sinh đ c t m vào đ a gi y theo n ng đ cho t ng lo i. Kháng sinh s khu ch tán chung quanh m t th ch môi tr ng nuôi c y. ng kính vòng vô khu n b c ch di n đ t tính nh y c m c a vi khu n đ i v i kháng sinh.
VII.2. Cách ti n hành VII.2.1. Chu n b v t li u
- V t li u: đ a kháng sinh c a hãng Biorad.
- a kháng sinh là nh ng đ a gi y có đ ng kính 6mm đ c t m dung d ch kháng sinh v i n ng đ tiêu chu n.
- Các tiêu chu n chính đ l a ch n kháng sinh:
- Ch n kháng sinh đ i di n cho nhóm có cùng ph ho t đ ng.
- Tùy thu c vào lo i vi khu n th nghi m.
- Tùy thu c vào v trí nhi m khu n.
- Tùy theo chi n l c và chính sách s d ng kháng sinh t ng vùng, t ng đ a ph ng.
- Môi tr ng th c hi n kháng sinh đ :
- Th ch Mueller Hinton (MHA) c a hãng Biorad là môi tr ng t t nh t đ th c hi n kháng sinh đ th ng qui (đ i v i vi khu n d m c). Môi tr ng đ c b o qu n trong t l nh, tr c khi dùng ph i t m 370C trong vòng 2 – 3 gi .
VII.2.2. Chu n b huy n d ch vi khu n
- Pha huy n d ch vi khu n có n ng đ 0,5 McFarland. Huy n d ch vi khu n nh v y ch a 1-2×108t bào/ml.
- Trên m t th ch phân l p thu n khi t, ch n ít nh t 3 – 5 khóm vi khu n đi n hình cho vào trong n c mu i sinh lý NaCl 0,85 %. l c đ u b ng máy l c. i u ch nh huy n d ch vi khu n đ t đ đ c chu n 0.5 McFarland.
- So sánh đ đ c chu n MC Farland 0,5 ml ta đ c h n h p d ch vi khu n ch a 108 CFU/ml.
VII.2.3. Cácăb c ti n hành
Trong vòng 15’ sau khi pha huy n dich vi khu n ti n hành tràn d ch khu n trên m t th ch.
Các b c ti n hành nh sau
- L c đ u ng nghi m ch a huy n d ch vi khu n.
- Hé m n p h p, h l a ng nghi m, đ huy n d ch vào h p.
- L c nh h p th ch đ huy n dch tràn đ u m t th ch. Sau đó rút h t l ng huy n dch trong đó ra, đ h p th ch khô. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- t đ a kháng sinh theo t ng lo i vi khu n lên m t th ch đư tr i huy n d ch vi khu n sao cho m t c a khoanh gi y áp sát vào m t c a môi tr ng, mép ngoài khoanh gi y cách thành trong c a đ a kho ng 15mm và khoanh n cách khoanh kia 20mm, đ yên trong vòng 15 phút, sau đó đem s p h p th ch trong t m 370C.
VII.2.4. c và bi n lu n k t qu
- Sau khi 24 gi , vi khu n s m c thành nh ng khóm m n ti p h p nhau và vòng vô khu n s là m t vòng tròn đ ng nh t.. N u vi khu n m c thành nh ng khóm riêng l thì m m c y quá loãng, ph i làm l i th nghi m.
- o đ ng kính vòng vô khu n phía sau c a đ a th ch b ng th c có đ n v là mm, b ng compa tr t hay th c k tr t.
- ánh giá k t qu đ ng kính vòng vô khu n đo đ c đ i chi u v i b ng gi i h n đ ng kính vòng c ch cho t ng lo i vi khu n d a theo tiêu chu n NCCLS và ghi nh n k t qu vi khu n nh y c m hay trung gian hay kháng đ i v i kháng sinh th nghi m.