2.3.5.1. Chọn cá bố mẹ
*Chọn cá đực:
Khi cá đã thành thục sinh dục, vuốt nhẹ hai bên lƣờn bụng hƣớng về lỗ sinh dục thì thấy có tinh dịch màu trắng đục chảy ra. Để có khả năng thụ tinh cao, nên kiểm tra độ vận động và mật độ tinh trùng dƣới kính hiển vi quang học. Chỉ sử dụng sẹ của những cá đực có tỉ lệ vận động của tinh trùng trên 80%.
* Chọn cá cái:
Cá cái khi thành thục sinh dục thì bụng to, mềm đều. Nếu cá lớn, có thể dùng que thăm trứng thu một ít trứng, cho vào đĩa petri kiểm tra và đánh giá các chỉ tiêu nhƣ màu sắc, độ đồng đều, độ lệch tâm của nhân và đƣờng kính trứng. Cá cái có trứng có màu vàng nhạt, đồng đều, nhân lệch tâm, là có thể chọn để kích thích sinh sản.
*Áp dụng phương pháp sinh sản nhân tạo vuốt khô:
Chọn cá cái và đực có sản phẩm sinh dục đạt giai đọan chín mùi, tiêm kích dục tố (KDT) / chất kích thích sinh sản (KTSS). Sau thời gian hiệu ứng thì cá cái sẽ rụng trứng. Vuốt trứng, vuốt tinh dịch và tiến hành thụ tinh nhân tạo. Thí nghiệm đƣợc bố trí với 3 liều lƣợng KDT / Chất KTSS khác nhau và lặp lại 3 lần.
- Liều lƣợng các kích dục tố (KDT) và chất kích thích sinh sản (KTSS): Sử dụng 3 loại KDT và chất KTSS thông dụng hiện nay là:
+ HCG (Human Chorionic Gonadotropin). Đối với cá cái, liều lƣợng tổng cộng 2.500 - 3.500 - 4.500 UI/kg;
25
+ LH - RHa (Lutenizing Hormon Releasing hormone analog), liều lƣợng tổng cộng 100 – 150 – 200µg/kg + tƣơng ứng với 5 – 10 – 15mg Domperidon hoặc 1-2-3 viên Motilium (DOM) chứa lƣợng Domperidon tƣơng ứng.
+ Não thùy thể cá (não cá chép có nguồn gốc tại nơi nghiên cứu, bảo quản trong aceton ngay sau khi lấy não), liều lƣợng tổng cộng 4 – 6 – 8mg/kg.
- Các KDT/chất KTSS đƣợc tiêm theo phép tiêm dẫn (1/10 liều lƣợng tổng cộng), tiêm sơ bộ (với 1/4 liều lƣợng tổng cộng) và quyết định. Cá đực tiêm một lần cùng với lần tiêm quyết định của cá cái với liều lƣợng bằng 1/3 – 1/4 liều quyết định của cá cái.
- Trong sinh sản nhân tạo, trứng đƣợc vuốt rồi trộn với tinh dịch để tiến hành thụ tinh.
- Số lƣợng trứng cá đẻ ra đƣợc tính theo phƣơng pháp trọng lƣợng hoặc đếm trực tiếp toàn bộ số trứng thu đƣợc.
- Những chỉ tiêu theo dõi trong quá trình kích thích sinh sản nhân tạo bao gồm: + Thời gian hiệu ứng (giờ): đƣợc tính từ khi tiêm liều quyết định đến khi cá cái rụng trứng.
+ Tỉ lệ rụng trứng đƣợc tính theo công thức (9):
+ Thời gian phát triển phôi: trứng cá từ lúc mới đẻ ra và đƣợc thụ tinh cho đến khi nở đƣợc chụp hình 15 phút một lần dƣới kính hiển vi.
+ Tỉ lệ thụ tinh (%): trứng thụ tinh đƣợc xác định khi phát triển đến giai đoạn phôi vị. Trứng sau khi thụ tinh (3 mẫu, mỗi mẫu 100 trứng) đƣợc ấp riêng. Khi trứng phát triển đến giai đoạn phôi vị thì đếm tổng số trứng thụ tinh, rồi tính theo công thức (10): (9) Tỉ lệ rụng trứng (%) = Tổng số cá cái đƣợc tiêm Số cá cái rụng trứng 100 Tỉ lệ thụ tinh (%) = (số trứng thụ tinh/tổng số trứng) 100 (10)
26 + Tỉ lệ nở đƣợc tính theo công thức (11)