đã thu thập
3.4.2.1. Phương pháp ứng dụng Kit chẩn đoán bệnh
Trên cùng một mẫu máu được hợp cả 3 phương pháp: ứng dụng Kit tự chế tạo theo nguyên lý CATT, Kit nhập ngoại và tiêm truyền chuột bạch để chẩn đoán bệnh cho đàn trâu của huyện Yên Sơn, tỉnh Tuyên Quang. Từ đó, so sánh và đánh giá hiệu quả chẩn đoán bệnh của Kit tự chế tạo.
Đây là phương pháp ngưng kết trực tiếp giữa kháng nguyên và kháng thể trên bản nhựa, được dùng để phát hiện kháng thể lưu động trong máu động vật nhiễm bệnh.
Nguyên lý: kháng nguyên TMT đã được nhuộm màu kết hợp với kháng thể tạo thành những đám kết tủa li ti màu xanh.
Cách tiến hành: dùng ống hút 2,5 ml dung dịch buffer cho vào lọ kháng nguyên chuẩn đã được nhuộm màu (CATT reagent), lắc đều. Cho vào lọ kháng nguyên đối chứng (đối chứng dương, đối chứng âm) mỗi lọ 0,5 ml dung dịch buffer, lắc đều. Dùng micropipette pha loãng huyết thanh theo tỷ lệ cần chẩn đoán (1/8). Cho các mẫu huyết thanh cần chẩn đoán đã được pha loãng lần lượt vào các vòng tròn của bản CATT, cho kháng nguyên đối chứng vào hai vòng tròn khác của bản, mỗi loại 1 giọt (tương đương 45µl). Sau đó cho vào tất cả các vòng tròn trên bản CATT 1 giọt kháng nguyên chuẩn. Dùng
que nhựa trộn đều. Cuối cùng cho lên máy lắc 5 phút (60 - 70 lần/ phút) và đánh giá kết quả.
3.4.2.2. Phương pháp tiêm truyền động vật thí nghiệm
Dùng máu tươi tiêm trực tiếp cho chuột bạch (không sử dụng chất chống đông). Mỗi chuột tiêm 0,2 ml máu, tiêm vào phúc mạc. Theo dõi biểu hiện của chuột thí nghiệm sau tiêm truyền. Mỗi ngày kiểm tra máu chuột thí nghiệm 1 lần để phát hiện tiên mao trùng bằng phương pháp xem tươi.
3.4.3. Một số quy định trong nghiên cứu đặc điểm dịch tễ
* Quy định về tuổi trâu
- Tuổi trâu nghiên cứu được phân ra theo 4 lứa tuổi: + ≤ 2 năm tuổi
+ > 2 – 5 năm tuổi + > 5 – 8 năm tuổi + > 8 năm tuổi
* Các tháng theo dõi trong năm
Chúng tôi tiến hành theo dõi các chỉ tiêu trong các tháng 1,2,3,4,5.
3.4.4. Xây dựng phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng
3.4.4.1. Phương pháp nghiên cứu khả năng mẫn cảm của T. evansi với một số thuốc trị tiên mao trùng trên chuột bạch
Thí nghiệm được bố trí trên 160 chuột/4 loại thuốc, mỗi loại sử dụng ở 3 mức liều: thấp hơn, cao hơn và đúng liều khuyến cáo của nhà sản xuất.
40 chuột gây nhiễm T. evansi được bố trí thí nghiệm đối với một loại thuốc. Sau gây nhiễm 3 ngày (máu ngoại vi có khoảng 80 - 100 TMT /vi trường) thì chia thành 2 lô:
- Lô thí nghiệm (gồm 30 chuột): mỗi mức liều tiêm cho 10 chuột. - Lô đối chứng (gồm 10 chuột): không tiêm thuốc.
Sau dùng thuốc, hàng ngày trích máu đuôi chuột kiểm tra bằng phương pháp soi tươi để xác định thời gian sạch tiên mao trùng trong máu. Nếu cả 10 chuột đều sạch tiên mao trùng, sau 15, 20, 30 ngày không thấy tiên mao trùng xuất hiện trở lại thì xác định thuốc có tác dụng tốt với tiên mao trùng ở liều sử dụng. Nếu có chuột không sạch tiên mao trùng hoặc sạch nhưng sau đó xuất
hiện trở lại tiên mao trùng thì thuốc có hiệu lực thấp ở liều sử dụng. So sánh với kết quả theo lô đối chứng.
Thí nghiệm được lặp lại 3 lần.
Kết quả thí nghiệm này cho phép xác định được thuốc nào còn hiệu lực cao với tiên mao trùng, thuốc nào đã có thể bị tiên mao trùng quen và kháng lại.
3.4.4.2. Phương pháp nghiên cứu biện pháp trị bệnh tiên mao trùng * Xây dựng phác đồ điều trị:
- Qua nghiên cứu về khả năng mẫn cảm của T. evansi trên chuột bạch, chúng tôi lựa chọn thuốc có hiệu lực cao, an toàn để xây dựng 3 phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu. Mỗi phác đồ gồm có:
+ Thuốc diệt tiên mao trùng + Thuốc trợ tim
+ Thuốc trợ sức, trợ lực.
* Thử nghiệm phác đồ điều trị trên diện hẹp:
Mỗi phác đồ được điều trị thử nghiệm cho 3 trâu (có kết quả dương tính với T. evansi bằng Kit chẩn đoán). Xét nghiệm máu trâu sau 5, 10, 15 và 20 ngày điều trị để kiểm tra tác dụng của phác đồ điều trị bằng phương pháp tiêm truyền chuột bạch.
* Thử nghiệm trên diện rộng:
Sau khi thử nghiệm trên diện hẹp, tiếp tục thử nghiệm trên số lượng trâu nhiễm tiên mao trùng nhiều hơn để xác định hiệu quả của mỗi phác đồ điều trị bệnh. Xét nghiệm máu trâu để xác định hiệu lực điều trị bằng phương pháp tiêm truyền chuột bạch. Từ đó, chọn một phác đồ tốt nhất để áp dụng rộng rãi ở các địa phương.
3.5. Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu thu được, được xử lý bằng phương pháp thống kê sinh học (Theo tài liệu của Nguyễn Văn Thiện, 2008), trên phần mềm Excel 2003.
Phần 4
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
4.1. Ứng dụng Kit chẩn đoán để xác định tình hình nhiễm tiên mao trùng ở trâu tại huyện Yên Sơn, tỉnh Tuyên Quang ở trâu tại huyện Yên Sơn, tỉnh Tuyên Quang
4.1.1. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở một số xã thuộc huyện Yên Sơn, tỉnhTuyên Quang Tuyên Quang
Trong thời gian nghiên cứu, chúng tôi đã thu thập 257 mẫu máu trâu tại 4 xã của huyện Yên Sơn gồm: Lang Quán, Tứ Quận, Hùng Lợi và Chân Sơn. Mỗi trâu được kiểm tra bằng Kit tự chế và Kit nhập ngoại. Sau đó những mẫu máu dương tính được tiêm truyền chuột bạch để phát hiện TMT. Kết quả được thể hiện qua bảng 4.1.
Bảng 4.1. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu tại một số xã thuộc huyện Yên Sơn, tỉnh Tuyên Quang
Địa phương (xã) Số trâu kiểm tra (con)
Kit tự chế Kit nhập ngoại MI Số trâu (+) Tỷ lệ (%) Số trâu (+) Tỷ lệ (%) Số trâu có TMT (con) Tỷ lệ (%) Xã Lang Quán 76 9 11,84 9 11,84 9 11,84 Xã Tứ Quận 44 8 18,18 8 18,18 8 18,18 Xã Hùng Lợi 98 6 6,12 6 6,12 6 6,12 Xã Chân Sơn 39 5 12,82 5 12,82 5 12,82 Tính chung 257 28 10,89 28 10,89 28 10,89
Kết quả bảng 4.1 cho thấy:
- Khi kiểm tra 257 mẫu huyết thanh của trâu tại 4 xã thuộc huyện Yên Sơn bằng Kit tự chế, có 28/257 mẫu huyết thanh dương tính, tỷ lệ nhiễm TMT là 10,89%.
- Tương tự như Kit tự chế, chúng tôi tiến hành thử nghiệm khả năng phát hiện tiên mao trùng của Kit nhập ngoại, trong 257 mẫu huyết thanh trâu, có 28 trâu nhiễm TMT T. evansi.
Sau khi xác định được 28 trâu có huyết thanh dương tính khi sử dụng Kit CATT nhiễm TMT, chúng tôi tiến hành lấy máu những trâu này tiêm truyền sang chuột bạch. Kết quả cho thấy: cả 28 mẫu đều phát hiện được TMT
Trypanosoma evansi thông qua xét nghiệm máu chuột bạch sau 7 – 10 ngày
tiêm truyền. Cụ thể là:
Xã Lang Quán có 9 mẫu phát hiện tiên mao trùng; xã Tứ Quận có 8 mẫu phát hiện tiên mao trùng; xã Hùng Lợi có 6 mẫu phát hiện tiên mao trùng; xã Chân Sơn có 5 mẫu phát hiện tiên mao trùng.
Từ kết quả trên ta có thể khẳng định rằng việc ứng dụng Kit chế từ kháng nguyên tái tổ hợp trong chẩn đoán bệnh tiên mao trùng có hiệu quả và độ chính xác cao do tỷ lệ mẫu huyết thanh dương tính tương đương với tỷ lệ phát hiện TMT bằng phương pháp tiêm truyền chuột bạch.
Kết quả cụ thể về tình hình nhiễm TMT ở trâu tại các xã như sau:
Nơi có tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng cao nhất là xã Tứ Quận (18,18%), sau đó, đến xã Chân Sơn (12,82%), Lang Quán (11,84%), Hùng Lợi (6,12%). Trong đó:
- Xã Lang Quán kiểm tra 76 trâu có 9 con bị nhiễm, chiếm tỷ lệ 11,84%. - Xã Tứ Quận kiểm tra 44 trâu có 8 con bị nhiễm, chiếm tỷ lệ 18,18%. - Xã Hùng Lợi kiểm tra 98 trâu có 6 con bị nhiễm, chiếm tỷ lệ 6,12%. - Xã Chân Sơn kiểm tra 39 trâu có 5 con bị nhiễm, chiếm tỷ lệ 12,82%. Sở dĩ tỷ lệ nhiễm TMT của các xã khác nhau là do nhiều yếu tố như điều kiện tự nhiên, chăm sóc, quản lý của người chăn nuôi ở các xã là không giống nhau. Một số xã ở gần đường quốc lộ, người dân chủ yếu làm nghề buôn bán, trâu, bò ít phải lao tác nặng nhọc. Mặt khác, số lượng cây cối, bụi rậm ít nên ruồi, mòng không có điều kiện phát triển và đốt, hút máu trâu, bò. Một số xã khác do cách xa đường quốc lộ, kinh tế còn nhiều khó khăn, người dân lại sống chủ yếu bằng nghề nông nghiệp nên trâu, bò
phải lao tác nhiều, phương thức chăn nuôi chủ yếu là chăn thả tự nhiên, đó là điều kiện thuận lợi để ruồi, mòng hút máu và truyền bệnh TMT.
Như vậy, tỷ lệ nhiễm TMT trên đàn trâu ở các xã là khá phổ biến. TMT ký sinh và gây bệnh làm cho trâu gầy, thiếu máu, nhiều con viêm kết mạc mắt, một số con có biểu hiện thùy thũng... Từ đó, chúng tôi cần có biện pháp phòng chống bệnh TMT hiệu quả cho đàn trâu của các xã.
4.1.2. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo lứa tuổi
Bảng 4.2. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo lứa tuổi
Lứa tuổi
(năm) Số trâu kiểm tra (con) Số trâu (+) Tỷ lệ (%)
≤ 2 36 2 5,56
>2 - 5 125 12 9,60
>5 - 8 83 11 13,25
> 8 13 3 23,08
Tính chung 257 28 10,89
Kết quả bảng 4.2 cho thấy:
Về tỷ lệ nhiễm: Trâu ở các lứa tuổi khác nhau đều nhiễm TMT T. evansi, nhưng tỷ lệ nhiễm ở các lứa tuổi khác nhau thì khác nhau. Kiểm tra mẫu máu của trâu dưới 2 năm tuổi có 2/36 trâu (5,56%) bị nhiễm. Với trâu ở lứa tuổi từ 2 – 5 năm tuổi, có 12/125 con bị nhiễm tiên mao trùng, chiếm 9,60%. Ở lứa tuổi 5 - 8 năm tuổi, có 11/83 (13,25%) trâu bị nhiễm tiên mao trùng. Đối với những trâu trên 8 năm tuổi, qua kiểm tra thì thấy 3/13 con (23,08%) bị nhiễm tiên mao trùng.
Từ kết quả trên, chúng tôi nhận xét: Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng cao nhất ở trâu là trên 8 năm tuổi (23,08%), thấp nhất là ở trâu dưới 2 năm tuổi (5,56%). Như vậy, tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng tăng dần theo lứa tuổi của trâu (tuổi trâu càng cao tỷ lệ càng tăng), kết quả này phù hợp với kết quả nghiên cứu của Phạm Sỹ Lăng (1982) [10]. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng cao ở lứa tuổi trên 8 tuổi là do trâu đã qua độ tuổi khai thác, nhưng do điều
kiện kinh tế, nên trâu vẫn phải lao tác, trong khi điều kiện chăm sóc, nuôi dưỡng kém nên không được cung cấp đủ chất dinh dưỡng, làm giảm sức đề kháng của trâu. Mặt khác, do thời gian trâu tiếp xúc với ruồi, mòng nhiều hơn nên khả năng bị đốt, hút máu khi lao tác hoặc chăn thả ngoài bãi cũng nhiều hơn. Với trâu dưới 2 năm tuổi do chưa phải lao tác, lại được chăm sóc với điều kiện tốt và một phần nhận được kháng thể từ sữa mẹ truyền cho nên có sức đề kháng cao, mặt khác thời gian sống chưa nhiều nên ít tiếp xúc và bị ruồi, mòng hút máu ít hơn.
4.1.3. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo tính biệt
Bảng 4.3: Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo tính biệt
Tính biệt Số trâu kiểm tra (con)
Số trâu nhiễm Tỷ lệ (%)
Đực 137 13 9,49
Cái 120 15 12,50
Tính chung 257 28 10,89
Kết quả bảng 4.3 cho thấy:
Về tỷ lệ nhiễm: Trong tổng số 28 trâu bị nhiễm tiên mao trùng có 13/137 trâu đực bị nhiễm tiên mao trùng, chiếm 9,49%. Với trâu cái thì có 15/120 con bị nhiễm tiên mao trùng, chiếm tỷ lệ 12,50%.
Từ kết quả trên ta thấy: Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu cái cao hơn trâu đực (12,50% so với 9,49%). Qua thực tế điều tra, chúng tôi thấy người dân chưa có chế độ chăm sóc tốt cho trâu cái trong độ tuổi sinh sản từ 3 - 8 năm tuổi, trâu cái vừa chửa đẻ vừa lao tác, không cung cấp đủ chất dinh dưỡng làm giảm sức đề kháng của trâu, đó là nguyên nhân làm cho trâu dễ cảm nhiễm TMT hơn so với trâu đực. Kết quả này phù hợp với nhận xét của Phan Văn Chinh (2006) [1].
4.1.4. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo các tháng trong năm
Bảng 4.4. Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu theo các tháng trong năm
Tháng Số trâu kiểm tra(con) Số trâu (+) Tỷ lệ (%)
1 40 3 7,50 2 51 5 9,80 3 65 7 10,77 4 33 4 12,12 5 68 9 13,24 Tính chung 257 28 10,89
Kết quả bảng 4.4 cho thấy:
Với tỷ lệ nhiễm: tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng cao nhất ở tháng 5 (13,24%), thấp nhất ở tháng 01, chiếm tỷ lệ 7,50%. Ở tháng 01, kiểm tra 40 trâu có 3 con nhiễm, chiếm 7,50%; ở tháng 02 có 5/51 trâu nhiễm tiên mao trùng, chiếm tỷ lệ 9,80%; với trâu ở tháng 3 khi kiểm tra 65 con thì có 7 con (10,77%) bị nhiễm; ở tháng 4 khi kiểm tra 33 trâu thì có 4 con nhiễm, chiếm tỷ lệ 12,12%; kiểm tra mẫu máu trâu ở tháng 5 thì thấy 9/68 con bị nhiễm, chiếm 13,24%.
Sở dĩ trâu nhiễm tiên mao trùng với tỷ lệ cao ở tháng 5, cao hơn các tháng 1, 2, 3, 4 vì: tháng 5 là thời điểm hết mùa xuân chuyển sang mùa hè, thời tiết nóng ẩm, mưa nhiều tạo điều kiện rất thuận lợi cho các loài ruồi, mòng phát triển trong thiên nhiên, chúng hoạt động, bay đi hút máu và truyền bệnh tiên mao trùng cho trâu. Tháng 1, 2, 3, 4 là thời điểm cuối mùa đông, đầu mùa xuân, thời tiết rất bất lợi cho gia súc như: trời rét, thức ăn khan hiếm, gia súc phải làm việc nặng, đồng thời sức đề kháng suy giảm, dẫn đến tình trạng bệnh tiên mao trùng phát ra. Như vậy, tháng 5 là tháng lây lan bệnh nhiều nhất, tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng cao nhất.
Theo Phan Văn Chinh (2006) [1], bệnh tiên mao trùng thường xảy ra trong các tháng nóng ẩm, mưa nhiều (từ tháng 4 đến tháng 9). Thời gian này điều kiện sinh thái thuận lợi cho các loại ruồi, mòng phát triển, hoạt động mạnh, hút máu súc vật và truyền tiên mao trùng. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi phù hợp với kết quả nghiên cứu của tác giả trên.
Từ kết quả nghiên cứu trên, chúng tôi có khuyến cáo đối với những người chăn nuôi trâu: cần dự trữ thức ăn cho trâu đủ về lượng và chất vào mùa rét, cho trâu nghỉ ngơi, tránh lao tác nặng để tăng sức đề kháng; về mùa hè cần phát quang cây cối, bụi rậm, làm chuồng trâu có lưới ngăn côn trùng..., tạo điều kiện bất lợi cho đời sống của côn trùng.
4.2. Nghiên cứu phác đồ điều trị bệnh T. evansi cho trâu và đề xuất biện pháp phòng chống
4.2.1. Xác định tính mẫn cảm của T. evansi với một số thuốc trị TMT trênchuột bạch chuột bạch
4.2.1.1. Xác định tính mẫn cảm của T. evansi với thuốc Trypamidium samorin trên chuột bạch
Bảng 4.5: Thời gian sạch T. evansi trong chuột khi sử dụng thuốc Trypamidium samorin
Lô Đối chứng Thí nghiệm Liều lượng thuốc
(mg /kgTT) 0 0,8 1,0 1,2
Số chuột (con) 10 10 10 10 Số T. evansi /VT trước
dùng thuốc (X ±mX ) 92,5 ± 1,92 93,6 ± 2,21 88,2 ± 1,60 92,2 ± 1,30
Chỉ tiêu theo dõi Kết quả
theo
dõi sau dùng thuốc
Tỷ lệ c h u ộ t s ạ c h T M T Tỷ lệ c h u ộ t c h ết Tỷ lệ c h u ộ t s ạ c h T M T Tỷ lệ c h u ộ t c h ế t Tỷ lệ c h u ộ t s ạ c h T M T Tỷ lệ c h u ộ t c h ết Tỷ lệ c h u ộ t s ạ c h T M T Tỷ lệ c h u ộ t c h ế t 24 giờ 0 1/10 0/10 3/10 0/10 0/10 3/10 0/10
48 giờ 0 7/10 0/10 4/10 5/10 0/10 9/10 0/10 72 giờ 0 10/10 3/10 7/10 10/10 0/10 10/10 0/10 10 ngày 0 10/10 3/10 7/10 10/10 0/10 10/10 0/10 15 ngày 0 10/10 3/10 7/10 10/10 0/10 10/10 0/10