cẩm chướng
Khuẩn lạc của nấm Fusarium oxysporum sau khi ựược cấy trên môi trường PAD ựặc có một số ựặc ựiểm sau:
Bảng 4.1 Một số ựặc ựiểm hình thái của nấm gây bệnh trên môi trường PDA ựặc sau 7 ngày nuôi cấy
Chỉ tiêu theo dõi đặc ựiểm
Dạng tản nấm Nấm mọc thành tản hình tròn, xốp, tương ựối dày.
Màu sắc tản nấm Màu trắng bao phủ xung quanh, ở trung tâm có màu phớt hồng hoặc màu hồng, có khi có màu tắm violet.
Màu sắc môi trường nuôi cấy Màu tắm nhạt hoặc màu xanh ựen.
Sự hình thành bào tử Ít hình thành hoăc không hình thành bào tử
Mặt trên của khuẩn lạc nấm Mặt dưới của khuẩn lạc nấm Hình 4.1 Khuẩn lạc của nấm Fusarium oxysporum
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 30
- Tiến hành nuôi cấy chủng nấm gây bệnh trên môi trường PDA ở nhiệt
ựộ 30oC trong ựiều kiện tối. Kết quả thu ựược thể hiện qua bảng 4.2.
Bảng 4.2 Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy ựến sinh trưởng của nấm
Thời gian nuôi cấy (ngày) đường kắnh tản nấm (cm)
2 1,76 3 3,04 4 3,82 5 4,23 6 5,08 7 5,78
Qua bảng 4.2 chúng tôi nhận thấy ựường kắnh tản nấm tăng tỷ lệ thuận với thời gian nuôi cấy, thời gian nuôi cấy càng dài thì ựường kắnh tản nấm càng tăng, ựường kắnh tản nấn tăng mạnh nhất qua 2 ngày thứ 2 và thứ 3, tăng 1,28 cm, trong 2 ngày từ ngày thứ 4 ựến ngày thứ 5 ựường kắnh tản nấm chỉ tăng 0,41cm. Sang ngày thứ 6 ựường kắnh tản nấm Fusarium oxysporum bắt ựầu tăng mạnh và sau 7 ngày nuôi cấy ở 30oC ựã ựạt 5,78 cm.
* Tiến hành nuôi cấy chủng nấm gây bệnh trên môi trường CLA ở nhiệt ựộ
30oC trong ựiều kiện tối, sau 10 ngày nuôi cấy lấy bào tử nấm sinh ra quan sát dưới kắnh hiển vi ựiện tử. Kết quả thu ựược như sau:
- Bào tử lớn cong hình lưỡi liềm, có từ 3 ựến 5 vách ngăn ngang - Bào tử nhỏ hình hạt gạo, ựơn bào, không có vách ngăn ngang - Sợi nấm không có vách ngăn ngang
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 31
* Nuôi cấy trên môi trường PDA lỏng
Sau 7 ngày nuôi cấy trên môi trường PDA ựặc, mẫu nấm ựược cấy chuyển sang môi trường PDA lỏng. Các thao tác ựược tiến hành trong ựiều kiện vô trùng. Bình môi trường PDA lỏng chứa nấm Fusarium oxysporum ựược nuôi lỏng lắc 150 vòng/phút trong ựiều kiện 25 Ờ 30oC. Sau 5 ngày nuôi cấy thì tiến hành lọc dịch nấm. Khi nghiên cứu về khả năng sản sinh enzym ngoại bào, Nguyễn Thị Hương Giang [5] thì trong khoảng từ 4- 5ngày lượng emzym ngoại bào ựược sinh ra nhiều nhất, nên ựây là thời ựiểm thắch hợp ựể thu lấy dịch nấm dùng ựể bổ sung vào môi trường nuôi cấy cẩm chướng in vitro.