Nấm Fusarium oxysporum ựã phân lập ựược cấy chuyển vào môi trường thạch PDA nuôi trong ựiều kiện tối ở nhiệt ựộ 25 Ờ 30oC. Sau 7 ngày nuôi cấy, mẫu nấm ựược cấy chuyển sang môi trường PDA lỏng. Các thao tác ựược tiến hành trong ựiều kiện vô trùng. Bình môi trường PDA lỏng chứa nấm Fusarium oxysporum ựược nuôi lỏng lắc 150 vòng/phút trong ựiều kiện tối ở 25 Ờ 30oC. Sau 5 -7 ngày nuôi cấy tùy theo ựiều kiện nhiệt ựộ nuôi cấy, thì tiến hành lọc dịch nấm.
Mẫu nấm nghiên cứu ựược lọc theo các bước sau:
Bước 1: Lọc sơ bộ
- Toàn bộ dịch nuôi cấy bao gồm cả xác nấm Fusarium oxysporum ựược lọc 2 lần qua màng gồm 3 lớp vải màn xếp chồng lên nhau. Thu lấy dịch lọc, loại bỏ phần cặn bã.
- Toàn bộ dịch lọc ựược lọc 2 lần qua màng lọc giấy Walkman hoặc ựem quay li tâm 15000 vòng trong 5 phút sau ựó thu lấy dịch lọc, loại bỏ cặn bã.
Bước 2: Thu dịch nuôi cấy nấm Fusarium oxysporum vô trùng Minisart kắch thước 0.2 ộm
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 24 - Dịch lọc thu ựược từ bước lọc sơ bộ ựược lọc qua màng lọc vô trùng Minisart kắch thước 0.2 ộm trong ựiều kiện vô trùng. Thu lấy dịch nuôi cấy nấm
Fusarium oxysporum vô trùng.
Thành phần các môi trường nuôi cấy nấm Fusarium oxysporum
Môi trường Thành phần đặc ựiểm
PDA
− Khoai tây: 250g/l
− Dextrose: 20g/l
− Agar: 20g/l
− pH: 5,7 ổ 0,1
Môi trường giàu dinh dưỡng giúp nấm phát triển mạnh hệ sợi. PDA lỏng − Khoai tây: 250g/l − − − − Dextrose: 20g/l − pH: 5,7 ổ 0,1
Môi trường giàu dinh dưỡng dùng ựể nuôi cấy lấy dịch lọc nấm Fusarium oxyspoum
CLA −
Agar : 20g/l
− Lá cẩm chướng khô
Môi trường nghèo dinh dưỡng ựể nấm mọc bào tử.
Phương pháp giữ giống
Môi trường giữ giống: Môi trường PDA
Cấy khuẩn lạc của chủng nấm Fusarium oxysporum ựã phân lập dựa vào môi trường PDA trong các ựĩa petri sau ựó dán giấy parapin rồi gối vào giấy báo và ựể trong tủ ựịnh ôn 28 Ờ 300C trong khoảng 4,5 ngày sau ựó bảo quản trong tủ lạnh
Giữ giống trong dung dịch gkyxeron: Dùng pipet hút dịch nấm ựã ựược nuôi trong môi trường dịch thể lỏng trong khoảng 3 ngày hút 500ộm dịch
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 25 glyxerol cho vào ống efpendol 1000ộm bảo quản trong tủ lạnh ở 00C sau 1 ngày, rồi chuyển sang tủ lạnh Ờ 300C ựể khoảng 1 Ờ 2 ngày, cuối cùng bảo quản trong tủ lạnh sâu Ờ 800C.