Thắ nghiệm 1: Nuôi cấy và tách chiết ựược dịch nấm Fusarium oxysporum
gây bệnh trên cây cẩm chướng
Nuôi cấy mẫu nấm Fusarium oxysporum ựã ựược phân lập và làm thuần trên môi trường PDA ựặc ựể hoạt hoá tăng khối lượng, sau ựó ựể tiến hành nuôi cấy chúng trong môi trường PDA lỏng ựể tăng sinh khối. Sau khoảng 7 Ờ 10 ngày tiến hành lọc dịch ựể thu dịch chiết.
Thắ nghiệm 2: Ảnh hưởng của dịch nuôi cấy nấm Fusarium oxysporum
ựến khả năng sống, sinh trưởng in vitro của các dòng, giống cẩm chướng nghiên cứu
Mỗi dòng, giống ựược tiến hành nuôi cấy trên môi trường có bổ sung dịch nấm bệnh Fusarium oxysporum ở các nồng ựộ khác nhau trong 2 chu kỳ:
- Chu kỳ I
Chu kỳ 1 ựược bố trắ như sau:
Nền môi trường là môi trường MS bổ sung 6,2g/l agar và 30g/l saccaroza, pH = 5,8 .
CT1: Môi trường nền.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 22 CT3: Môi trường nền + 30% v/v dịch nấm Fusarium oxysporum.
CT4: Môi trường nền + 45% v/v dịch nấm Fusarium oxysporum.
2. Chu kỳ II
Cây sống của các dòng, giống cẩm chướng ở chu kỳ I sau khi ựược phục hồi qua môi trường MS bổ sung 6,2g/l agar và 30g/l saccaroza, pH = 6,2 ựược tiếp tục nuôi cấy chu kỳ II trên các môi trường sau:
CT1: Môi trường nền.
CT2: Cây sống CT2 chu kì I + 30% v/v dịch nấm Fusarium oxysporum.
CT3: Cây sống CT2 chu kì I + 45% v/v dịch nấm Fusarium oxysporum.
CT4: Cây sống CT2 chu kì I + 45% v/v dịch nấm Fusarium oxysporum.
Thắ nghiệm 3: Ảnh hưởng của dịch nuôi cấy nấm Fusarium oxysporum ựến khả năng ra rễ in vitro của các dòng cẩm chướng nghiên cứu
Cây sống của các dòng, giống cẩm chướng ở chu kỳ 2 sau khi ựược nuôi cấy phục hồi qua môi trường MS bổ sung 6,2g/l agar và 30g/l saccaroza, chuẩn pH = 6,2 thì sẽ chuyển nuôi cấy trên môi trường ra rễ có bổ sung 30% dịch nấm. Thắ nghiệm ựược bố trắ như sau:
Nền môi trường là môi trường MS bổ sung 6,2g/l agar, 30g/l saccaroza , 0,5g/l than hoạt tắnh và 0,5 mg/l α-NAA, pH = 6,2.
CT1: Môi trường nền.
CT2: Cây sống CT2 chu kì II + 30% v/v dịch nấm Fusarium oxysporum.
CT3: Cây sống CT2 chu kì II + 30% v/v dịch nấm Fusarium oxysporum.
CT4: Cây sống CT2 chu kì II + 30% v/v dịch nấm Fusarium oxysporum.
Kết thúc thắ nghiệm 3 sẽ phân lập ựược mẫu cẩm chướng có khả năng chống chịu nấm Fusarium oxysporum trong ựiều kiện in vitro.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 23
Thắ nghiệm 4: đánh giá khả năng chống chịu nấm bệnh bằng lây nhiễm nhân tạo
Sử dụng mẫu cẩm chướng ựã ựược nuôi cấy sau thắ nghiệm 3 trồng trong vườn ươm và lây nhiễm nhân tạo nấm bệnh ựể ựánh giá khả năng chống chịu của các dòng
Công thức thắ nghiệm:
CT1: Không bổ sung dịch bào tử nấm vào giá thể trồng cây
CT2: Bổ sung dịch bào tử nấm vào giá thể trồng cây