a, Thu thập số liệu:
* Nhĩm hồi cứu: gồm 19 bệnh nhân.
+ Thu thập thơng tin lâm sàng, tuổi, giới, đặc điểm đại thể được
đánh giá thơng qua việc hồi cứu bệnh án tại Bệnh viện Việt Đức.
+ Đặc điểm tổn thương vi thể được đánh giá qua thu thập tiêu bản, khối nến bệnh phẩm cắt, nhuộm lại.
* Nhĩm tiến cứu: gồm 37 bệnh nhân.
- Ghi nhận thơng tin lâm sàng qua bệnh án.
- Đánh giá vị trí khối u: bên phải, bên trái, hai bên. - Mơ tả các đặc điểm đại thể của u.
b, Nghiên cứu hình thái học - Đại thể
+ Vị trí: bên phải, bên trái, hai bên. + Kích thước khối u: ≤ 5 cm; > 5 cm. + Mật độ mơ u: • Mật độ u chắc, đặc. • Mật độ u mềm, mủn nát. + Màu sắc mơ u: • Vàng tươi. • Vàng sẫm. • Màu nâu. • Trắng hồng. - Vi thể
Bệnh phẩm u sau mổ sau khi đã mơ tả hình thái đại thể được cố định trong dung dịch formol 10% trong 24 giờ. Sau đĩ tiến hành pha bệnh phẩm lấy mẫu làm xét nhiệm mơ bệnh học. Những u nhỏ cố định, chuyển cả u, những u lớn cắt từ 3 đến 4 mảnh. Các mảnh sau đĩ được chuyển vùi nến, cắt mỏng, cĩ độ dày từ 3-4µ m và tiến hành nhuộm
Hematoxylin – Eosin (H.E) theo quy trình kỹ thuật thường quy tại khoa Giải phẫu bệnh – bệnh viện Hữu nghị Việt Đức.
Định typ mơ bệnh học theo tiêu chuẩn phân loại của TCYTTG 2004 bằng kính hiển vi quang học cĩ độ phĩng đại từ 40-400 lần.
c, Nghiên cứu hĩa mơ miễn dịch
Những trường hợp u ác tính của TTT và trường hợp khĩ chẩn đốn trên tiêu bản nhuộm H.E được nhuộm HMMD để đánh giá tính chất mơ học u giúp chẩn đốn xác định với các dấu ấn sau: Chromogranin A, Vimentin, Synaptophysin, CK, Hepatocyte, LCA.
Kỹ thuật nhuộm HMMD được thực hiện tại khoa Giải phẫu bệnh Bệnh viện Hữu nghị Việt Đức và khoa Giải phẫu bệnh Bệnh việc trung
ương quân đội 108 (kỹ thuật Biotin-Avidin Complex). Quy trình nhuộm như sau:
- Bệnh phẩm được cắt dày 4µm, dàn trên lam kính phủ silane. - Ủ qua đêm ở nhiệt 560C
- Tẩy nến bằng Toluen và cồn như nhuộm thường. - Rửa nước trong 5 phút.
- Đặt tiêu bản trong dung dịch citrate 0.01mol/l, pH = 6.0, đun sơi trong nồi áp suất trong 5 phút.
- Rửa nước cất trong 5 phút.
- Khử peroxidase nội sinh bằng H2O2 trong 10 phút - Rửa nước cất trong 5 phút. - Ủ kháng thể thứ nhất trong 1 giờ. - Rửa TBS 3 lần, mỗi lần 5 phút. - Phủ ABC trong 30 phút. - Rửa TBS 3 lần, mỗi lần 5 phút. - Ủ với DBA trong 10 phút - Rửa nước chảy trong 5 phút.
- Tẩy nước, phủ men. Nhận định kết quả:
+ Các tiêu bản đều cĩ nhuộm chứng kèm theo. + Dương tính khi các tế bào u bắt màu nâu. + Âm tính khi các tế bào u khơng cĩ màu nâu.