Phương phỏp kiểm tra cỏc đặc tớnh sinh hoỏ và khả năng

3. í nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

2.4.3. Phương phỏp kiểm tra cỏc đặc tớnh sinh hoỏ và khả năng

đường của cỏc chủng vi khuẩn phõn lập được

- Thử phản ứng Oxydase: Tiến hành trờn giấy được thấm 1% dung dịch Tetrametyl-p-Phenylenediamine hydrochloride. Dựng que cấy bạch kim lấy khuẩn lạc từ mụi trường thạch bụi lờn trờn mặt giấy đó thấm thuốc thử. Nếu thấy xuất hiện màu tớm đen sau 30 giõy là phản ứng dương tớnh. Nếu khụng thấy xuất hiện màu tớm đen hoặc khụng đổi màu là phản ứng õm tớnh.

- Thử phản ứng Catalase: Dựng phiến kớnh sạch, nhỏ một giọt dung dịch oxy già (H2O2 3%) lờn trờn, que cấy bạch kim lấy khuẩn lạc từ mụi trường thạch trộn đều với giọt H2O2 3%, nếu cú hiện tượng sủi bọt là phản ứng dương tớnh.

- Thử phản ứng sinh Indol: Cấy chủng vi khuẩn cần kiểm tra vào mụi trường nước thịt. Để tủ ấm ở 370C trong 24 giờ. Nhỏ 0,5 ml dung dịch Kovac’s vào, phản ứng dương tớnh khi quan sỏt thấy một vũng màu đỏ trờn mặt mụi trường.

- Thử phản ứng lờn men đường: Cấy chủng vi khuẩn cần kiểm tra vào mụi trường nước thịt, nuụi ở tủ ấm 370C trong 24 giờ, sau đú nhỏ 0,2 ml canh khuẩn vào dung dịch đường đó chuẩn bị trước. Sau 24 giờ giữ ở tủ ấm 370

C, nếu quan sỏt thấy màu của mụi trường thay đổi thành mầu đỏ là dương tớnh, nếu vi khuẩn cú sinh hơi thỡ thấy hơi trong ống Durham và đẩy mực nước trong ống Durham xuống.

* Phương phỏp thực hiện cỏc phản ứng nhận biết cấp I đối với S. suis

- Kiểm tra khả năng dung huyết: quan sỏt khả năng làm tan huyết xung quanh khuẩn lạc của chủng vi khuẩn cần kiểm tra sau khi đó nuụi cấy trờn đĩa thạch mỏu cừu, ủ ở tủ ấm 37oC (5% CO2) qua 24 giờ.

+ Dung huyết kiểu α: vựng dung huyết xung quanh khuẩn lạc thường cú màu xanh (dung huyết từng phần hay dung huyết khụng hoàn toàn)

+ Dung huyết kiểu β: bao quanh khuẩn lạc là một vựng tan mỏu hoàn toàn trong suốt, cú bờ rừ ràng do Hemoglobin bị phõn huỷ hoàn toàn.

+ Dung huyết kiểu  (hay cũn gọi là khụng dung huyết): khụng làm biến đổi thạch mỏu.

- Phản ứng với KOH: dựng que cấy nhựa, phết khuẩn lạc của vi khuẩn

S. suis mọc trờn mụi trường thạch mỏu lờn một phiến kớnh sạch. Sau khi nhỏ 1 giọt dung dịch KOH 3% mà khụng thấy cú hiện tượng tạo thành lớp keo dớnh giữa khuẩn lạc và thuốc thử trong vũng 60 giõy thỡ chủng vi khuẩn kiểm tra được đỏnh giỏ là phản ứng õm tớnh. Vi khuẩn S. suis cho phản ứng với KOH 3% õm tớnh.

- Phản ứng Catalase: thực hiện tương tự như trong phản ứng với KOH, chỉ khỏc là thay thuốc thử KOH 3% bằng dung dịch H2O2 3%. Nếu khụng quan sỏt thấy hiện tượng sủi bong búng trong vũng vài giõy thỡ chủng vi khuẩn kiểm tra sẽ được đỏnh giỏ là cú phản ứng Catalase õm tớnh. Vi khuẩn S. suis cho phản ứng Catalase õm tớnh.

- Kiểm tra khả năng phỏt triển trong mụi trường NaCl 6.5%: Chủng vi khuẩn cần kiểm tra được cấy vào mụi trường NaCl 6.5%. Sau khi ủ ở tủ ấm 37oC trong 24 giờ, nếu quan sỏt mà khụng thấy mụi trường cú hiện tượng đục là phản ứng õm tớnh. Vi khuẩn S. suis khụng phỏt triển trong mụi trường NaCl 6.5% (phản ứng õm tớnh).

* Phương phỏp thực hiện hệ thống API 20 Strep đối với S. suis

Sau khi thực hiện phản ứng nhận biết cấp I, chỉ cỏc chủng vi khuẩn được kết luận là S. suis mới được tiến hành cỏc phản ứng với hệ thống định danh API 20 Strep.

Việc thực hiện hệ thống API20 Strep với cỏc chủng vi khuẩn đó được xỏc định là S. suis nhằm cỏc mục đớch: định danh và giỏm định vi khuẩn S. suis; nghiờn cứu một số đặc tớnh sinh vật, hoỏ học của chỳng.

Cỏch tiến hành như sau: mỗi chủng vi khuẩn cần kiểm tra được cấy thành một lớp dày đặc trờn mặt đĩa thạch mỏu Columbia, nuụi cấy ở 370

C/24 giờ (5% CO2). Dựng tăm bụng vụ trựng thu hoạch vi khuẩn từ đĩa thạch, rồi hũa tan vào 2 ml nước cất vụ trựng để đạt được độ đục tương đương với ống số 4 của dóy so độ đục chuẩn McFarland. Trong khay nhựa đó cú chứa cỏc loại thuốc thử, tiến hành nhỏ khoảng 100l huyễn dịch này vào mỗi lỗ đối với cỏc phản ứng từ VP đến ADH. Phần huyễn dịch cũn lại được trộn đều với 1 ampule mụi trường API GP cú sẵn trong bộ kit thử và nhỏ vào cỏc lỗ cũn lại, từ ADH đến GLYG. Toàn bộ khay nhựa cú chứa cỏc phản ứng được đặt vào một giỏ nhựa cú chứa khoảng 5 ml nước cất bờn dưới để làm ẩm. Ủ ở tủ ấm 370C. Sau 4 giờ, tiến hành nhỏ cỏc thuốc thử thớch hợp: VP 1 và VP 2 đối với phản ứng VP, NIN đối với phản ứng HIP, ZYM A và ZYM B đối với cỏc phản ứng PYRA, GAL, GUR, GAL, PAL và LAP, rồi tiến hành đọc kết quả sau 10 phỳt. Đối với một số phản ứng, nếu kết quả chưa rừ ràng thỡ cú thể đọc lại sau 24 giờ.

Cỏch đọc kết quả: cỏc phản ứng được đỏnh giỏ là dương tớnh hay õm tớnh dựa vào một bảng so màu sẵn được cung cấp bởi nhà sản xuất, được tớnh điểm và mó húa bằng cỏc chữ số. Kết quả của mỗi chủng vi khuẩn, cuối cựng sẽ được hiển thị bằng một dóy số gồm 7 chữ số. Tiến hành tra bảng nhận biết để cú thể kết luận là chủng vi khuẩn kiểm tra thuộc loại vi khuẩn nào.