3. í nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
2.4.2. Thu thập mẫu và phõn lập vi khuẩn
2.4.2.1. Thu thập mẫu
- Mẫu bệnh phẩm gồm: phổi, cuống họng, lỏch, gan của lợn chết nghi mắc bệnh viờm phổi.
- Mẫu được bảo quản trong điều kiện lạnh 40C, theo quy trỡnh bảo quản mẫu của Bộ mụn Vi trựng, Viện Thỳ y và được vận chuyển ngay đến phũng nghiệm để tiến hành cỏc xột nghiệm tiếp theo.
2.4.2.2. Phõn lập và giỏm định vi khuẩn
Cỏc phương phỏp nuụi cấy và giỏm định vi khuẩn được thực hiện theo quy trỡnh nghiờn cứu thường quy của Bộ mụn Vi trựng, Viện Thỳ y.
Cỏc mẫu bệnh phẩm được ria cấy trờn cỏc loại mụi trường như nước thịt thường, thạch mỏu, thạch Mac Conkey, thạch chocolate. Bệnh phẩm trước khi ria cấy vào cỏc mụi trường phải dựng bụng tẩm cồn đốt mặt ngoài để diệt
tạp khuẩn. Sau đú dựng kộo đó được sỏt trựng cẩn thận cắt sõu vào bờn trong phần đó đốt, lấy một mẩu nhỏ cỏc mụ, rồi phết lờn mặt cỏc loại mụi trường thạch, đồng thời cho vào mụi trường nước thịt, bồi dưỡng ở tủ ấm 37o
C trong 24 giờ. Căn cứ vào tớnh chất mọc và hỡnh thỏi của khuẩn lạc trờn cỏc mụi trường sẽ tiến hành chọn khuẩn lạc nghi của P. multocida và S. suis, phết kớnh nhuộm Gram kiểm tra hỡnh thỏi vi khuẩn dưới kớnh hiển vi, đồng thời tiến hành giỏm định vi khuẩn qua cỏc phản ứng sinh húa và cấy giữ giống để dựng cho cỏc nghiờn cứu tiếp theo. Cú thể túm tắt phương phỏp nuụi cấy, phõn lập vi khuẩn từ bệnh phẩm theo sơ đồ sau:
Sơ đồ phõn lập vi khuẩn
Mẫu bệnh phẩm
Nuụi cấy trờn cỏc mụi trường:
Nước thịt, thạch mỏu, thạch Mac Conkey, thạch Chocolate
Chọn, thuần khiết từng loại khuẩn lạc
Nhuộm Gram kiểm tra hỡnh thỏi vi khuẩn
Giỏm định vi khuẩn qua cỏc đặc tớnh sinh hoỏ và lờn men đường
Kiểm tra độc lực Xỏc định serotype