- Màng sinh chất còn nguyên vẹn, không bị phá hủy.
a) Môi trường nuôi cấy
• Môitrường nuôi cấy tốt nhấtđối với tếbào trần làtươngtự
hoặc có thành phầnloãnghơnmôitrường dùng cho tái sinh
cơquan và phôi từcác mẫu thực vật.
• Điều chỉnhlượngnatri amonvàcanxicần cho kích thích sự
phân bào.
• Natri amon(20mM) sửdụng trong hầu hết các môitrường có
biểu hiệnđộc tínhđối với tếbào trần. Đểtránh gâyđộc, đồng thời thúcđẩy sựphân bào, nồngđộnatri amonđược dùng thấphơn, ở¼đến ½ nồngđộtrung bình.
• Ngược lại, hàmlượngcanxicó xuhướngtăngtrong nhiều môitrường nuôi tếbào trần. Bìnhthường 0,5 – 3,0 mM, khi
tănglên 14 – 40 mM sẽthúcđẩy phân bào sớm, tăngtính
đồng bộgiữa các tếbào, làm giảm sự ngưngkết và hoá nâu
6.1.3. Các yếu tố ảnh hưởng đến
sinh trưởng và phát triển của tế
bào trần
a) Môi trường nuôi cấy
• Các thành phần hữucơ nhưinositol, axit nicotinic, pyridoxin, thiamin, glyxin, axit folic và biotin được tìm thấy trong nhiều môitrường.
• Cazein thuỷphân, D-Ca-pantothenat, cholin chlorit, xystein, axit malic, axit ascobic, adenin sufat, riboflavin và glutaminthườngđượcđưavào môi
trường nuôi tếbào trần với số lượng nhỏ(0,01- 10mg/l) để đẩy nhanh sựsinh tổng hợp thành tế
bào và thúc đẩy sựphân bào.
• Đa sốcác thành phần này không được sửdụng sau khi tế bào trầnđã tái tạo thành tếbào mới và phân chia.
6.1.3. Các yếu tố ảnh hưởng đến
sinh trưởng và phát triển của tế
bào trần
a) Môi trường nuôi cấy
• Đườngđược dùng trong môitrường nuôi cấy tế
bào trầnnhưmột nguồn cacbon và chấtổnđịnh thẩm thấu.
• Các loạiđườngđược dùng làm chất thẩm thấu bao gồm manitol, sorbitolởnồngđộtừ0,3-0,7M.
• Saccarozơ vàglucozơlàm nguồn cacbonởhàm
lượng từ0,2-0,6M. Nồngđộ đườngđược giảm dần sau khi các tếbào bắt đầu phân chia.
• Các chất kích thích sinhtrưởng là rất cần thiết trong nuôi cấy tế bào trần. Loại và nồngđộsử
dụng là khác nhau giữa các loài và kiểu tái sinh. Axit naphthalen axetic (NAA) và axit 2,4-
6.1.3. Các yếu tố ảnh hưởng đến
sinh trưởng và phát triển của tế
bào trần