II. PHƯƠNG PHÁP:
2. Đẩy bằng 1,6 lít gradient thẳng đệm ammonium acetate pH 7.2 cĩ nồng độ muối thay đổi từ 0.05 M đến 1M
Nồng độ protein trong các đoạn sắc ký được xác định bằng quang phổ kế ở 280 nm. Độc lực của các phân đoạn protein sau sắc ký được đánh giá trên chuột nhắt trắng 18-20 gam.
Đánh giá độ tinh khiết của các phân đoạn protein sau sắc ký bằng kỹ thuật điện di trên gel PAGE gradient 8-18% với SDS sau khi đã xử lý các protein bằng DTT.
II.2. Tinh chế độc tố từ nọc rắn hổ chúa:
II.2.1. Tinh chế qua sắc ký lọc Sephadex G-50 superfine:
Cho qua cột G-50 (5.5x27cm) 577mg nọc khơ rắn hổ chúa Ophigophagus hannah trong 10 ml đệm ammonium acetate 0.05M pH 7.2.
Đẩy protein bằng dung dịch đệm ammonium acetate 0.05M pH 7.2. Hứng đoạn 10ml/ đoạn.
Nồng độ protein trong các đoạn sắc ký được xác định qua quang phổ ở 280nm. Độc lực của các phân đoạn protein sau sắc ký được đánh giá trên chuột nhắt trắng 18-20 gam.
Đánh giá độ tinh khiết của các phân đoạn protein sau sắc ký bằng kỹ thuật điện di trên gel PAGE gradient 8-18% với SDS sau khi đã xử lý các protein bằng DTT.
Chọn phân đoạn sắc ký cĩ độc lực cao tiến hành bước tinh chế tiếp theo trên cột sắc ký trao đổi ion Biorex 70.
II.2.2. Tinh chế qua sắc ký trao đổi ion BioRex -70:
Cho 84 mg phần cĩ độc tính (peak 3) đã được tinh chế qua cột sắc ký lọc G -50 Superfine vào cột sắc ký trao đổi ion BioRex 70 (2 x 20 cm) được cân bằng trước với dung dịch ammonium acetate 0.05M pH 7.2. Sau khi đã nạp xong tồn bộ protein lên cột, giải hấp protein với:
1. 50 ml đệm ammonium acetate 0.05M pH 7.2
2. Đẩy bằng 300 ml đệm ammonium acetae pH 7.2 cĩ nồng độ muối thay đổi từ 0.1 M đến 1M.