- Để thạch vào hộp đĩng kín: 100% độ ẩm ở 40C Quan sát kết quả sớm nhất là sau 24 giờ.
3.6. Phương pháp tách và lưu trữ kháng thể bằng kỹ thuật tủa với ammonium sulfate 50% độ bão hịa:
sulfate 50% độ bão hịa:
3.6.1. Nguyên tắc:
Các protein tan trong dung dịch do cĩ liên kết chặt với rất nhiều phân tử nước (Hình 3)
Khi một lượng lớn của muối ammonium sulfate được thêm vào dung dịch protein, các ion muối sẽ thu hút và tách các phân tử nước ra khỏi phân tử protein. Bị mất nước, các phân tử protein sẽ bị đẩy đến tương tác với nhau và bắt đầu kết tập lại (Hình 4). Khi đủ lượng muối thêm vào chúng sẽ kết tủa. Nếu quá trình này được thực hiện tại nhiệt độ lạnh, protein sẽ kết tủa mà khơng bị biến tính. Mỗi loại protein tủa ở một nồng độ bão hịa AS đặc trưng.
Các IgG và transferin tủa ở những nồng độ AS thấp hơn (35-45%) các proteins khác của huyết thanh, đặc biệt albumin ở nồng độ cao hơn (70%S).
Mục đích của giai đoạn này là thu được IgG và loại bỏ phần lớn albumin và các protein huyết thanh khác.
Hình 3: Protein trong đệm ammonium sulphate
3.6.2. Vật liệu:
- Muối ammonium sulfate
- Dung dịch kháng huyết thanh sau lần tiêm nhắc lại thứ 3,4
3.6.3. Tiến hành:
- Dung dịch mẹ ammonium sulfate bão hịa (800 g/ L) được chuẩn bị và dự trữ tại nhiệt độ phịng.
- Pha lỗng huyết thanh với đệm PBS theo tỷ lệ 1:3 (v/v). 1 thể tích của huyết thanh hịa lỗng được khuấy nhẹ tại 4°C trong lúc thêm vào từ từ 1 thể tích dung dịch ammonium sulfate bão hịa. Khuấy hỗn hợp dung dịch trong 30 phút. Để yên hỗn hợp qua đêm. Ly tâm hỗn hợp 6.000 vịng/phút, tại 4°C trong 15 phút. Loại nước nổi, thu
tủa. Rửa tủa bằng dung dịch ammonium sulfate 50% bão hịa, 3 lần. Bảo quản tủa tại 4°C trong dung dịch ammonium sulfate 50% bão hịa .