- Để thạch vào hộp đĩng kín: 100% độ ẩm ở 40C Quan sát kết quả sớm nhất là sau 24 giờ.
3.7. Phương pháp xác định hiệu lực trung hịa độc lực nọc tồn phần của kháng thể kháng độc tố trên chuột:
thể kháng độc tố trên chuột:
Kỹ thuật này được thực hiện bằng cách trộn nọc với kháng huyết thanh theo những tỷ lệ khác nhau. Cĩ thể thực hiện theo hai cách, hoặc cố định lượng nọc (thường được xác định bằng giá trị LD50) và thay đổi lượng kháng huyết thanh, hoặc cố định lượng kháng huyết thanh và thay đổi lượng nọc. Hỗn hợp trên được ủ ở 37°C trong 15 hay 30 phút trước khi tiêm vào động vật thí nghiệm (chuột nhắt trắng) bằng đường tĩnh mạch đuơi. Những động vật này được theo dõi về triệu chứng bị liệt mềm trong vịng 48 giờ. Từ số chuột chết và sống, tính ra lượng nọc mà 1ml kháng huyết thanh cĩ khả năng trung hịa. Người ta cĩ thể diễn tả kết quả này bằng số đơn vị LD50 trên một mililít kháng huyết thanh hay bằng số mg nọc khơ trên một mililít kháng huyết thanh [34].
Đơi khi nhiều nhà nghiên cứu thích tiến hành các xét nghiệm theo những trình tự diễn ra trong tự nhiên bằng cách tiêm nọc vào dưới da trước, sau đĩ tiêm kháng huyết thanh vào tĩnh mạch sau [35]. Khoảng cách giữa hai lần tiêm ảnh hưởng nhiều đến kết quả thí nghiệm. Tuy nhiên phương pháp này hầu như khơng cĩ thuận lợi nào hơn phương pháp trên.
Trên thực tế bao giờ nọc cũng tồn tại trong cơ thể trong một khoảng thời gian nào đĩ, đơi khi là rất lâu trước khi kháng huyết thanh được đưa vào. Một số nhà nghiên cứu đã đưa ra một số thơng số đánh giá khác như:
• FLT (Fatal Limit Time): khoảng thời gian từ khi tiêm một liều gây chết của nọc đến khi xuất hiện cái chết đầu tiên của súc vật thí nghiệm.
• LMT (Last Mortality Time): khoảng thời gian từ khi tiêm một liều gây chết của nọc đến khi xuất hiện tất cả các súc vật thí nghiệm đều chết.
• Người ta nhận thấy rằng khả năng bảo vệ của kháng huyết thanh sẽ tăng khi nĩ được đưa vào trước FLT [36]. Tuy nhiên, LMT hay FLT đều lệ thuộc vào một số phản ứng sinh lý phức tạp, khác nhau tùy theo lồi động vật và con vật và tùy theo lồi và con rắn gây độc.
Hiện nay cho dù chúng ta muốn chuẩn hĩa phương pháp xác định khả năng trung hịa nọc của một kháng huyết thanh thì phương pháp ủ hỗn hợp nọc và kháng huyết thanh trước vẫn được sử dụng rộng rãi do nĩ phụ thuộc ít nhất vào các hoạt động dược động học của kháng huyết thanh cũng như động học của độc tố ở con vật mà nĩ chỉ phụ thuộc vào nồng độ của kháng thể và khả năng trung hịa của nĩ [37].
* Tiến hành thực nghiệm: