3.1. đối tượng, vật liệu, ựịa ựiểm và thời gian nghiên cứu
+ Vật liệu : 45 mẫu giống cà chua nhập nội từ Pháp, Mỹ, Nhật và Nga. Thắ nghiệm khảo sát ựặc ựiểm nông sinh học sử dụng ựối chứng là giống cà chua Hồng Lan.
Bảng 3.1. Nguồn vật liệu sử dụng trong nghiên cứu
+ địa ựiểm nghiên cứu: đề tài ựược thực hiện tại phòng thắ nghiệm bộ môn Sinh học phân tử và Công nghệ sinh học ứng dụng - khoa Công nghệ
STT Ký hiệu Nguồn thu thập STT Ký hiệu Nguồn thu thập
1 7 Mỹ 24 131 Việt Nam
2 18 Pháp 25 138 Nhật
3 25 Việt Nam 26 140 Việt Nam
4 30 Nga 27 152 Mỹ 5 44 Nga 28 153 Mỹ 6 45 Pháp 29 160 Mỹ 7 50 Pháp 30 163 Mỹ 8 51 Pháp 31 164 Mỹ 9 53 Pháp 32 R1 Nga 10 64 Pháp 33 R2 Nga 11 69 Pháp 34 R3 Nga 12 72 Pháp 35 R4 Nga 13 73 Pháp 36 R5 Nga 14 84 Pháp 37 R6 Nga 15 91 Pháp 38 R7 Nga 16 96 Pháp 39 167 Mỹ 17 99 Pháp 40 168 Mỹ 18 101 Pháp 41 189 Mỹ 19 104 Pháp 42 190 Mỹ 20 105 Pháp 43 H13 Pháp 21 108 Pháp 44 H14 Pháp 22 109 Pháp 45 đC Việt Nam 23 125 Pháp
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 26
sinh học, trung tâm bảo tồn và phát triển nguồn gen cây trồng - Trường ựại học Nông Nghiệp Hà Nội, Trâu Quỳ - Gia Lâm Ờ Hà Nội.
+ Thời gian thực hiện : từ ngày 5/08/2011 Ờ 5/08/2012
3.2. Nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.2.1. Nội dung nghiên cứu:
1. Khảo sát một số ựặc ựiểm nông sinh học, năng suất, chất lượng quả, của các mẫu giống cà chua nhập nội ở vụ ựông xuân.
2. Phát hiện gen chắn chậm rin trong tập ựoàn các mẫu giống bằng phương pháp PCR.
3. Phát hiện các gen kháng virus xoăn vàng lá: Ty-1, Ty-2, Ty-3 trong tập ựoàn các mẫu giống bằng phương pháp PCR.
4. đánh giá ựặc tắnh chắn chậm của quả của các mẫu giống mang gen chắn chậm rin (phát hiện nhờ PCR) và so sánh với một số mẫu giống không mang gen rin.
3.2.2. Phương pháp nghiên cứu:
3.2.2.1. Bố trắ thắ nghiệm
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo kiểu khảo sát tập ựoàn không nhắc lại, trong ựó mỗi mẫu giống trồng 22 cây.
Thời vụ : đông xuân: gieo ngày 21/9/2011, trồng ngày 21/10/2011. Mật ựộ: Mỗi ô thắ nghiệm có diện tắch: 6,5m2 trồng 22 cây.
Kỹ thuật trồng và chăm sóc:Áp dụng theo hướng dẫn trong tiêu chuẩn ngành 10TCN219: 2006 của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn (Bộ NN và PTNT, 2006).
- Giai ựoạn vườn ươm: hạt giống ựược gieo trên giá thể gồm trấu hun và ựất bột theo tỷ lệ 1:1. Hạt ựược gieo trong khay bầu, tưới phun mù ựủ ẩm, ựặt trong nhà có mái che. Hàng ngày chăm sóc, tưới nước và giữ ẩm cho cây. Khi cây con ựược 5-6 lá thì trồng.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 27
- Giai ựoạn trồng ở ruộng sản xuất:
+ Chọn ựất, lên luống: thắ nghiệm ựược bố trắ trên ựất trồng lúa, lên luống cao 25 cm, mặt luống rộng 1 m, rãnh rộng 50 cm.
+ Mật ựộ 2.67 vạn cây/ha, trồng 2 hàng/luống, cây x cây 50 cm, hàng x hàng 65 cm.
+ Lượng phân bón cho 1 ha: 15-20 tấn phân hữu cơ, 80-100kg N, 80- 100kg P2O5, 100-120kg K2O. Bón lót toàn bộ phân hữu cơ, toàn bộ phân lân, 1/3 phân ựạm và 1/3 kali. Lượng ựạm và kali còn lại chia ựều bón thúc vào 3 lần xới vun.
+ Tưới nước: sau khi trồng cần tưới nước giữ ẩm cho ựất khoảng 75% + Vun xới, làm cỏ: vun xới kết hợp bón thúc lần 1 sau trồng 30 ngày, lần 2 khi sau trồng 60 ngày, lần 3 sau trồng 80 ngày. Thường xuyên nhổ bỏ cỏ dại.
+ Làm giàn hình chữ A khi cây cao 30 - 40 cm (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
+ Tỉa cành: ựối với giống vô hạn tỉa bỏ cành phụ, chỉ ựể lại 2 thân chắnh.
+ Phòng trừ sâu bệnh hại: theo dõi và phòng trừ bệnh xoăn vàng lá, mốc sương, héo xanh vi khuẩn bằng thuốc Daconil, Zinep; phòng trừ sâu cắt lá, sâu xám, sâu vẽ bùa, sâu xanh, sâu ựục quả bằng thuốc Sherpa.
+ Thu hoạch khi quả bắt ựầu chuyển màu (bắt ựầu chắn), số lần thu căn cứ vào ựặc ựiểm chắn của giống.
3.2.2.2. Phương pháp ựánh giá một số ựặc ựiểm nông sinh học, năng suất và chất lượng quả
Phương pháp ựánh giá ựược áp dụng theo hướng dẫn trong tiêu chuẩn ngành 10TCN219: 2006 (Bộ NN và PTNT, 2006) và 10TCN557-2002 (Bộ NN và PTNT, 2002).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 28
+ Thời gian từ trồng ựến ra hoa: khi 50% số cây trong ô thắ nghiệm có hoa ựầu tiên.
+ Thời gian từ trồng ựến thu quả ựợt 1: khi 50% số cây theo dõi có quả chắn.
+ Thời gian từ trồng ựến kết thúc thu hoạch: tắnh ựến ngày thu hết quả thương phẩm.
- Một số chỉ tiêu về cấu trúc cây và hình thái lá:
+ Kiểu hình sinh trưởng: quan sát ựặc tắnh ra hoa và sinh trưởng của cây vào giai ựoạn ra hoa: kiểu hữu hạn, khi cây ra hoa rộ thân chắnh ngừng sinh trưởng; kiểu vô hạn, cây ra hoa thân chắnh vẫn tiếp tục sinh trưởng và kiểu bán hữu hạn, trung gian giữa hai kiểu trên.
+ Mức ựộ xanh của lá: quan sát màu mặt trên phiến lá khi thu hoạch lứa quả thứ 2-3, các mức: xanh ựậm, xanh, xanh sáng.
+ Dạng lá: quan sát sự phân thùy của lá chét thời kỳ thu hoạch lứa quả thứ 2 - 3, gồm dạng lá bình thường và dạng lá khoai tây.
+ Số ựốt từ gốc tới chùm hoa thứ nhất: theo dõi thời kỳ ra chùm hoa thứ 2 - 3.
+ Chiều cao từ gốc tới chùm hoa thứ nhất: ựo từ cổ rễ ựến chùm hoa 1, theo dõi thời kỳ ra chùm hoa 2 - 3.
+ Chiều cao thân chắnh: ựo từ cổ rễ ựến ựỉnh sinh trưởng, giai ựoạn kết thúc thu hoạch.
- Cấu trúc chùm hoa và ựặc ựiểm nở hoa
+ Kiểu chùm hoa: ựơn giản - hoa ra trên một nhánh chắnh; trung gian - hoa ra trên 2 nhánh chắnh; phức tạp - chùm hoa chia thành nhiều nhánh.
+ Số hoa/chùm: số hoa nở của 5 chùm ựầu tiên trên 3 cây thời kỳ hoa rộ, lấy trung bình.
+ đặc ựiểm nở hoa: quan sát và phân ra nở hoa rộ tập trung hay nở hoa rải rác.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 29
- Năng suất và các yếu tố cấu thành năng suất:
+ Tỷ lệ ựậu quả: ựếm số quả ựậu của 5 chùm hoa ựầu tiên của 3 cây vào thời kỳ kết thúc ựâụ quả ựể xác ựịnh tỷ lệ ựậu quả trên từng chùm và tỷ lệ ựậu quả trung bình, gồm các mức: rất thấp (dưới 10%), thấp (10 - 20%), trung bình (21- 40%), cao (41 - 60%) và rất cao (trên 60%).
+ Tổng số quả/cây: tổng số quả các lần thu/cây, theo dõi 5 cây, lấy trung bình.
+ Khối lượng trung bình quả: tổng khối lượng của số quả ựiều tra/số quả.
+ Năng suất cá thể (khối lượng quả/cây): tổng khối lượng quả thu ựược/cây, theo dõi 5 cây, tắnh trung bình.
- đặc ựiểm hình thái và chất lượng quả:
+ đường kắnh quả (ựộ lớn quả): ựo ựường kắnh quả ở phần lớn nhất của 10 quả chắn thuộc lứa quả thứ 2 hoặc 3 ựể xác ựịnh ựộ lớn của quả.
+ Chiều cao quả (H): bổ dọc quả, ựo chiều cao từ ựỉnh ựến ựáy quả của 10 quả chắn, chùm quả 2-3.
+ Chỉ số hình dạng quả: I = H/ D, dựa vào chỉ số hình dạng quả ựể phân biệt các dạng quả: dạng quả dẹt (I < 0.6), tròn dẹt (0.6 < I < 0.9), tròn (0.9 < I < 1.1), tròn dài (1,3 > I >1,1) và dài (I > 1,3). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
+ Số ngăn hạt/ quả: bổ ngang quả ựếm số ngăn hạt của 5 quả, lấy trung bình.
+ độ chắc quả: dùng tay nắn khi quả chắn hoàn toàn, chùm quả 2-3. Gồm các mức: mềm, trung bình, cứng.
+ độ dày thịt quả: tiến hành cắt ựôi quả cà chua và dùng thước ựo ựộ dày phần thịt quả.
+ Mức ựộ xanh của quả: quan sát màu phần ựáy quả xanh của chùm quả 2 - 3, mô tả mức ựộ: xanh nhạt, xanh, xanh ựậm.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 30
với phần còn lại của quả trưởng thành lứa quả 2-3, mô tả mức ựộ: xanh, xanh nhạt, trung bình, xanh ựậm.
+ Màu sắc quả xanh: quan sát quả khi còn xanh, ựánh giá ở 3 mức ựộ: xanh, xanh ựậm và xanh sáng.
+ Màu sắc quả chắn: quan sát màu quả của chùm quả thứ 2 - 3 khi chắn hoàn toàn.
+ đánh giá hương vị quả: có hay không hương vị thơm ựặc trưng của cà chua hoặc có hương vị phụ khác (hăng, ngái).
+ độ Brix%: ựo khi quả chắn hoàn toàn (dùng khúc xạ kế), lấy ngẫu nhiên quả của lứa 2-3 của 5 cây mẫu, phân tắch chậm nhất sau thu hoạch 3 ngày, các mức: thấp (dưới 3,5%), trung bình (3,6-4,4%), cao (4,5 - 6,0%), rất cao (trên 6%).
+ Khẩu vị (*): ựánh giá cảm quan theo các mức: chua, chua dịu, nhạt, ngọt dịu, ngọt, ngọt ựậm.
+ độ ướt thịt quả (*): dùng dao sắc cắt ngang quả và phân biệt: ướt - mặt thịt quả ướt, không có dịch quả chảy ra; khô nhẹ - mặt thịt quả lấm tấm dịch quả; khô - mặt thịt quả ráo nước.
(*): theo hướng dẫn của trung tâm nghiên cứu và phát triển giống rau chất lượng cao, đại học Nông nghiệp Hà Nội
- Thống kê tình hình nhiễm một số sâu bệnh hại chắnh trên ựồng ruộng: bệnh xoăn vàng lá do virus, bệnh héo rũ gốc mốc trắng, mốc sương, ựốm vòng và héo xanh vi khuẩn.
3.2.2.4. Ứng dụng chỉ thị phân tử ựể phát hiện gen chắn chậm và gen kháng virrus xoăn vàng lá