4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.4.1.Kết quả PCR phát hiện gen Ty-
Theo Castro và cộng sự (2007), sản phẩm PCR thu ựược với marker JB-1 chỉ có 1 vạch băng 900 bp. Sau khi ủ sản phẩm với TaqI, các cây mang kiểu gen ty-1/ty-1 xuất hiện 1 vạch băng khoảng 400 bp, các cây có gen Ty-1 kháng virus xoăn vàng lá xuất hiện 1 vạch 450 bp và 1 vạch 500 bp. Chúng tôi sử dụng cặp mồi này ựể phát hiện gen kháng Ty-1 trong 27 mẫu giống cà chua.
A. Sản phẩm PCR với marker JB-1
B. Sản phẩm PCR sau khi cắt bởi enzymTaqI
Hình 4.3. Ảnh ựiện di sản phẩm PCR phát hiện gen Ty-1 với cặp mồi JB-1
Kết quả ựiện di sản phẩm PCR cắt bởi enzyme Taq I cho thấy hầu hết các mẫu giống ựều chỉ có 1 vạch band có kắch thước 400bp. Riêng mẫu giống
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 59
190 có 1 vạch băng kắch thước 450bp và 1 vạch band kắch thước 500bp ựúng như mô tả của Castro và cộng sự (2007). Như vậy, trong các mẫu giống kiểm tra thì chỉ giống 190 mang gen kháng Ty-1.
4.4.2. Kết quả PCR phát hiện gen Ty-2
Theo Garcia (2007) cặp mồi PCR T0302F/TY-2R1 cho 1 ựoạn có kắch thước 600bp tương ứng với locus kháng Ty-2 và 1 ựoạn có kắch thước 450bp tương ứng với locus mẫn cảm Ty-2. Chúng tôi cũng sử dụng cặp mồi này ựể phát hiện gen Ty-2 và hình ảnh ựiện di sản phẩm PCR cho thấy các mẫu giống ựều có 1 vạch band kắch thước khoảng 450bp. Như vậy, theo như mô tả ở trên chúng tôi kết luận trong các mẫu giống nghiên cứu không có mẫu giống nào mang gen Ty-2.
Hình 4.4. Ảnh ựiện di sản phẩm PCR phát hiện gen Ty-2 bằng cặp mồi T0302F/TY-2R1
Giếng 1: 1 Kb DNA Ladder; giếng 2: 7; giếng 3: 18; giếng 4: 25; giếng 5: 30; Giếng 6: 44; giếng 7: 45; giếng 8: 64; giếng 9: 69; giếng 10: 72; giếng 11: 84;Giếng 12: 91; giếng 13: 99; giếng 14: 101; giếng 15: 189; Giếng 16: 190
4.4.3. Kết quả PCR phát hiện gen Ty-3
Theo Ji và Scott (2006) cặp mồi P6-25-F2/P6-35-R5 nhân lên 1 ựoạn kắch thước 320bp (ty-3) ựối với giống mẫn cảm, 1 ựoạn kắch thước 450bp (Ty- 3) ựối với giống kháng bắt nguồn từ S. chilense LA2779 , 1 ựoạn kắch thước 630bp (Ty-3a) ựối với giống kháng bắt nguồn từ LA1932 và 1 ựoạn kắch thước 660bp (Ty-3b) ựối với giống kháng bắt nguồn từ LA1969 (Ji và cộng sự, 2007). Sở dĩ có sự khác nhau về kắch thước của 3 gen kháng này là do mồi
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 60
P6-25-F2/P6-35-R5 ựược thiết kế trên gen G8 của locus FER (25 cM, BAC clone 56B23, AY678298 ). Trình tự gen G8 là khác nhau ựối với các dòng có nguồn gốc từ 3 mẫu giống cà chua dại này (Maxwell và cộng sự, 2007).
Chúng tôi tiến hành ựiện di sản phẩm PCR từ cặp mồi này của 27 mẫu giống kiểm tra thì thấy hầu hết các giống ựều có vạch băng của alen mẫn cảm ty- 3 (320bp). Riêng mẫu giống 189 có thêm 1 vạch kắch thước 660bp và mẫu giống 190 có thêm 1 vạch 630bp. Kết quả này trùng khớp với mô tả của Ji và cộng sự (2007). Như vậy, mẫu giống 189 có gen Ty-3b dạng dị hợp tử (Ty-3b/ty-3) và mẫu giống 190 có gen Ty-3a dạng dị hợp tử (Ty-3a/ty-3). So sánh với kết quả ựánh giá khả năng kháng bệnh của các mẫu giống bằng phương pháp ghép lây nhiễm cho thấy cả 2 mẫu giống này ựều có khả năng kháng với TYLCV.
Hình 4.5. Ảnh ựiện di sản phẩm PCR phát hiện gen kháng Ty-3 Giếng 1: 1 Kb DNA Ladder; giếng 2: 190; giếng 3: 189; giếng 4: 140; giếng 5: 138; giếng 6: 109; giếng 7: 108; giếng 8: 105; giếng 9: 104; giếng 10: 101