Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.2.1. Kết quả phân lập virus trên phôi trứng từ mẫu gà chết nghi mắc Newcastle
Dựa vào bảng 3.2 cho thấy: Từ tháng 7 năm 2012 ựến tháng 6 năm 2013 chúng tôi ựã tiến hành mổ khám tổng cộng 915 con gà chết. Trong ựó, phát hiện có 205 gà có bệnh tắch nghi Newcastle chiếm tỷ lệ 22,4%. Các tháng kiểm tra ựều có tỷ lệ gà chết mắc Newcastle.Trong tháng 1 năm 2013 mổ khám 82 con gà chết có 30 con có bệnh tắch nghi Newcastle chiếm tỷ lệ cao nhất (36,7%). Còn thấp nhất là tháng 9 năm 2012 mổ khám 45 con, có 6 con có bệnh tắch nghi Newcastle chiếm tỷ lệ (13,3%).
3.2. Kết quả phân lập và giám ựịnh virus Newcastle từ gà bệnh lưu thông tại chợ Hà Vỹ thông tại chợ Hà Vỹ
Như vậy tại chợ ựầu mối gia cầm Hà Vỹ có sự lưu hành của virus Newcastle hay không? để biết ựược ựiều này chúng tôi ựã tiến hành phân lập, giám ựịnh virus từ gà bệnh lưu thông tại chợ Hà Vỹ.
3.2.1. Kết quả phân lập virus trên phôi trứng từ mẫu gà chết nghi mắc Newcastle Newcastle
Chúng tôi tiến hành giám sát sự lưu hành của virus Newcastle trên gia cầm ựang buôn bán tại chợ ựầu mối Hà Vỹ bằng phương pháp phân lập virus trên phôi trứng. Qua sự giám sát này chúng ta có thể biết ựược sự tồn tại của virus ở gia cầm buôn bán tại chợ Hà Vỹ.
Chúng tôi sử dụng những mẫu não gà có bệnh tắch ựặc trưng của gà nghi mắc bệnh Newcastle ựể cấy truyền trên phôi gà 9 ngày tuổi nhằm xác ựịnh sự có mặt của virus.Thắ nghiệm ựược tiến hành mỗi tháng 1 lần. Mỗi phôi tiêm 0,2ml huyễn dịch não gà có ựộ pha loãng 10-1 vào xoang niệu mô. Mỗi mẫu tiêm cho 5 quả, mỗi lần thắ nghiệm ựể 10 quả làm ựối chứng. Kết quả thể hiện ở bảng 3.3 và 3.4.
Bảng 3.3. Kết quả phân lập virus trên phôi trứng từ mẫu gà chết nghi mắc Newcastle tại chợ Hà Vỹ.
Kết quả Mẫu không gây chết
phôi Mẫu gây chết phôi Năm Tháng Số mẫu kiểm tra Số mẫu Tỷ lệ % Số mẫu Tỷ lệ % 7 20 5 25,0 15 75,0 8 15 1 6,7 14 93,3 9 6 0 0 6 100,0 10 18 6 33,4 12 66,7 11 14 2 14,3 12 85,7 2012 12 15 6 40,0 9 60,0 1 30 10 33,4 20 66,7 2 16 1 6,3 15 93,7 3 24 6 25,0 18 75,0 4 17 2 11,8 15 88,2 5 12 4 33,4 8 66,6 2013 6 18 2 11,1 16 88,9 Tổng hợp 205 45 22,0 160 78,0
Kết quả ở bảng 3.3 cho thấy: Trong mỗi ựợt kiểm tra ựều có một tỷ lệ mẫu gây chết phôi. Tỷ lệ gây chết phôi dao ựộng từ 60-100%, kiểm tra 205 mẫu có 160 mẫu gây chết phôi chiếm tỷ lệ 78%.
Virus Newcastle chủng cường ựộc, khi nhân lên trên phôi gà thường gây chết phôi trong thời gian từ 24 - 60 giờ. Cùng với việc theo dõi các mẫu bệnh phẩm gây chết phôi, chúng tôi còn theo dõi thời gian virus gây chết phôi. Kết quả thu ựược trình bày ở bảng 3.4.
Kết quả ở bảng 3.4 cho thấy:
Tháng 7 năm 2012: tiêm hỗn dịch não gà của 15 mẫu cho 75 phôi tỷ lệ phôi chết trong từng thời ựiểm là: 25Ờ 36 giờ chết 22 phôi chiếm tỷ lệ 29%, thời ựiểm 37 Ờ 48 giờ chết 35 phôi chiếm tỷ lệ 47%, thời ựiểm 49 Ờ 52 giờ chết 12 phôi chiếm tỷ lệ 16%, thời ựiểm 53 Ờ 72 giờ chết 6 phôi chiếm tỷ lệ 8%.Tỷ lệ phôi chết ựạt 100%.
Lần thắ nghiệm của tháng 8 năm 2012: tiêm hỗn dịch não gà của 14 mẫu(1 mẫu cho 5 phôi) cho 70 phôi. Tỷ lệ phôi chết trong từng thời ựiểm là: 25 Ờ 36 giờ chết 15 phôi chiếm tỷ lệ 21%, thời ựiểm 37 Ờ 48 giờ chết 28 phôi chiếm tỷ lệ 40%, thời ựiểm 49 Ờ 52 giờ chết 9 phôi chiếm tỷ lệ 13%, thời ựiểm 53 Ờ 72 giờ chết 5 phôi chiếm tỷ lệ 7%. Tỷ lệ gây chết phôi ựạt 81,4%.
Tháng 9 năm 2012: tiêm hỗn dịch não gà của 6 mẫu cho 30 phôi. Tỷ lệ phôi chết trong từng thời ựiểm là: 25 Ờ 36 giờ chết 6 phôi chiếm tỷ lệ 20%, thời ựiểm 37 Ờ 48 giờ chết 14 phôi chiếm tỷ lệ 47%, thời ựiểm 49 Ờ 52 giờ chết 5 phôi chiếm tỷ lệ 17%, thời ựiểm 53 Ờ 72 giờ chết 2 phôi chiếm tỷ lệ 7%.Tỷ lệ phôi chết ựạt 90%.
Tháng 10 năm 2012: tiêm hỗn dịch não gà của 12 mẫu cho 60 phôi. Tỷ lệ phôi chết trong từng thời ựiểm là: 25 Ờ 36 giờ chết 18 phôi chiếm tỷ lệ 30%, thời ựiểm 37 Ờ 48 giờ chết 31 phôi chiếm tỷ lệ 51%, thời ựiểm 49 Ờ 52 giờ chết 10 phôi chiếm tỷ lệ 17%, thời ựiểm 53 Ờ 72 giờ chết 1 phôi chiếm tỷ lệ 2%.Tỷ lệ phôi chết ựạt 100%.
Tháng 11 năm 2012: tiêm hỗn dịch não gà của 12 mẫu cho 60 phôi. Tỷ lệ phôi chết trong từng thời ựiểm là: 25 Ờ 36 giờ chết 6 phôi chiếm tỷ lệ 10%, thời ựiểm 37 Ờ 48 giờ chết 34 phôi chiếm tỷ lệ 57%, thời ựiểm 49 Ờ 52 giờ chết 14 phôi chiếm tỷ lệ 23%, thời ựiểm 53 Ờ 72 giờ chết 6 phôi chiếm tỷ lệ 10%.Tỷ lệ phôi chết ựạt 100%.
Tháng 12 năm 2012: tiêm hỗn dịch não gà của 9 mẫu cho 45 phôi. Tỷ lệ phôi chết trong từng thời ựiểm là: 25Ờ 36 giờ chết 4 phôi chiếm tỷ lệ 9%, thời ựiểm 37 Ờ 48 giờ chết 28 phôi chiếm tỷ lệ 62%, thời ựiểm 49 Ờ 52 giờ chết 8 phôi chiếm tỷ lệ 18%, thời ựiểm 53 Ờ 72 giờ chết 5 phôi chiếm tỷ lệ 11%.Tỷ lệ phôi chết ựạt 100%.
Tháng 1 năm 2013: tiêm hỗn dịch não gà của 20 mẫu cho 100 phôi. Tỷ lệ phôi chết trong từng thời ựiểm là: 25 Ờ 36 giờ chết 15 phôi chiếm tỷ lệ 15%, thời ựiểm 37 Ờ 48 giờ chết 48 phôi chiếm tỷ lệ 48%, thời ựiểm 49 Ờ 52 giờ chết 26 phôi chiếm tỷ lệ 26%, thời ựiểm 53 Ờ 72 giờ chết 10 phôi chiếm tỷ lệ 10%.Tỷ lệ phôi chết ựạt 99%.
Tháng 2 năm 2013: tiêm hỗn dịch não gà của 15 mẫu cho 75 phôi. Tỷ lệ phôi chết trong từng thời ựiểm là: 25 Ờ 36 giờ chết 12 phôi chiếm tỷ lệ 16%, thời ựiểm 37 Ờ 48 giờ chết 36 phôi chiếm tỷ lệ 48%, thời ựiểm 49 Ờ 52 giờ chết 9 phôi chiếm tỷ lệ 12%, thời ựiểm 53 Ờ 72 giờ chết 3 phôi chiếm tỷ lệ 4%.Tỷ lệ phôi chết ựạt 80%.
Tháng 3 năm 2013: tiêm hỗn dịch não gà của 18 mẫu cho 90 phôi. Tỷ lệ phôi chết trong từng thời ựiểm là: 25 Ờ 36 giờ chết 21 phôi chiếm tỷ lệ 23%, thời ựiểm 37 Ờ 48 giờ chết 37 phôi chiếm tỷ lệ 41%, thời ựiểm 49 Ờ 52 giờ chết 15 phôi chiếm tỷ lệ 17%, thời ựiểm 53 Ờ 72 giờ chết 8 phôi chiếm tỷ lệ 9%.Tỷ lệ phôi chết ựạt 90%.
Tháng 4 năm 2013: tiêm hỗn dịch não gà của 15 mẫu cho 75 phôi. Tỷ lệ phôi chết trong từng thời ựiểm là: 25 Ờ 36 giờ chết 17 phôi chiếm tỷ lệ 23%, thời ựiểm 37 Ờ 48 giờ chết 28 phôi chiếm tỷ lệ 37%, thời ựiểm 49 Ờ 52 giờ chết 12 phôi chiếm tỷ lệ 16%, thời ựiểm 53 Ờ 72 giờ chết 5 phôi chiếm tỷ lệ 7%. Tỷ lệ phôi chết ựạt 82,7%.
Tháng 5 năm 2013: tiêm hỗn dịch não gà của 8 mẫu cho 40 phôi. Tỷ lệ phôi chết trong từng thời ựiểm là: 24 Ờ 36 giờ chết 6 phôi chiếm tỷ lệ 15%, thời ựiểm 37 Ờ 48 giờ chết 15 phôi chiếm tỷ lệ 37%, thời ựiểm 49 Ờ 52 giờ chết 8 phôi chiếm tỷ lệ 20%, thời ựiểm 53 Ờ 72 giờ chết 3 phôi chiếm tỷ lệ 8%.Tỷ lệ phôi chết ựạt 80%.
Tháng 6 năm 2013: tiêm hỗn dịch não gà của 16 mẫu cho 80 phôi. Tỷ lệ phôi chết trong từng thời ựiểm là: 25 Ờ 36 giờ chết 16 phôi chiếm tỷ lệ 20%, thời ựiểm 37 Ờ 48 giờ chết 25 phôi chiếm tỷ lệ 31%, thời ựiểm 49 Ờ 52 giờ chết 22 phôi chiếm tỷ lệ 27%, thời ựiểm 53 Ờ 72 giờ chết 9 phôi chiếm tỷ lệ 11%.Tỷ lệ phôi chết ựạt 90%.
Những phôi chết khi mổ khám thường có biểu hiện xuất huyết trên da và dưới da. Trong khi ựó ở lô ựối chứng, phôi phát triển bình thường, khi mổ khám không có bệnh tắch trên phôi.
Kết quả trên cho thấy virus có trong não gà của các mẫu gà chết nghi mắc Newcastle có khả năng gây chết phôi rất cao, dao ựộng từ 80 Ờ 100%.Tỷ lệ phôi
chết tập trung ở thời ựiểm từ 25 ựến 52 giờ.Tỷ lệ gây chết phôi và thời gian gây chết phôi gà của virus này phù hợp với các chủng virus Newcastle có ựộc lực cao.
Tóm tắt quy trình phân lập virus Newcastle trên phôi gà như sau:
Nghiền, pha với nước sinh lý thành 10-1
Thử phản ứng HA
Gây nhiễm phôi trứng 9-10 ngày tuổi
Ấp tiếp ở 37oC/72 giờ
Thu trứng ựể lạnh 4oC/12 giờ
Mổ trứng
Thu nước ối và niệu
Kiểm tra vô trùng
Làm phản ứng HA
Nếu HA dương tắnh
Giám ựịnh virus bằng phản ứng HI
Bảng 3.4 Kết quả xác ựịnh thời gian gây chết phôi của virus từ bệnh phẩm gà nghi mắc Newcastle
Thời gian theo dõi
0 Ờ 24 giờ 25 Ờ 36 giờ 37 Ờ 48 giờ 49 Ờ 52 giờ 53 Ờ 72 giờ
Lô TN Số mẫu Số phôi thắ nghiệm Liều lượng tiêm Số phôi chết Tỷ lệ (%) Số phôi chết Tỷ lệ (%) Số phôi chết Tỷ lệ (%) Số phôi chết Tỷ lệ (%) Số phôi chết Tỷ lệ (%) Số phôi chết Tỷ lệ % Tháng 7 15 75 0,2 0 0 22 29 35 47 12 16 6 8 75 100,0 Tháng 8 14 70 0,2 0 0 15 21 28 40 9 13 5 7 57 81,4 Tháng 9 6 30 0,2 0 0 6 20 14 47 5 17 2 7 27 90,0 Tháng 10 12 60 0.2 0 0 18 30 31 51 10 17 1 2 60 100,0 Tháng 11 12 60 0,2 0 0 6 10 34 57 14 23 6 10 60 100,0 Năm 2012 Tháng 12 9 45 0,2 0 0 4 9 28 62 8 18 5 11 45 100,0 Tháng 1 20 100 0,2 0 0 15 15 48 48 26 26 10 10 99 99,0 Tháng 2 15 75 0,2 0 0 12 16 36 48 9 12 3 4 60 80,0 Tháng 3 18 90 0,2 0 0 21 23 37 41 15 17 8 9 81 90,0 Tháng 4 15 75 0,2 0 0 17 23 28 37 12 16 5 7 62 82,7 Tháng 5 8 40 0,2 0 0 6 15 15 37 8 20 3 8 32 80,0 Năm 2013 Tháng 6 16 80 0,2 0 0 16 20 25 31 22 27 9 11 72 90,0 đC 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Virus Newcastle có khả năng gây ngưng kết hồng cầu của một số loài ựộng vật như: gà, bò, người, chuột lang.... Vì vậy, ựể xác ựịnh sự có mặt của virus gây ngưng kết hồng cầu trong các mẫu phân lập từ não gà nghi mắc Newcastle tại chợ Hà Vỹ, chúng tôi ựã làm phản ứng HA. Kết quả thu ựược ựược trình bày ở bảng 3.5
Bảng 3.5. Kết quả xác ựịnh tỷ lệ virus gây ngưng kết hồng cầu của các mẫu phân lập từ gà nghi mắc Newcastle.
Kết quả kiểm tra Mẫu không
gây chết phôi Mẫu gây chết phôi Hiệu giá HA log2
Năm Tháng xét nghiệm Số mẫu phân lập Số mẫu Tỷ lệ có HA (+) Số mẫu 1 2 3 4 5 6 Tỷ lệ mẫu có HA (+) Số mẫu phân lập có HA (+) 7 20 5 0 15 2 5 4 4 100 15 8 15 1 0 14 4 2 6 2 100 14 9 6 0 0 6 3 1 2 100 6 10 18 6 0 12 4 5 1 1 1 100 12 11 14 2 0 12 4 3 1 3 1 100 12 2012 12 15 6 0 9 2 4 2 1 100 9 1 30 10 0 20 8 4 6 1 1 100 20 2 16 1 0 15 4 5 4 2 100 15 3 24 6 0 18 2 6 4 4 2 100 18 4 17 2 0 15 6 1 5 3 100 15 5 12 4 0 8 1 3 4 100 8 2013 6 18 2 0 16 5 4 5 1 1 100 16 Tổng hợp 205 45 0 160 38 44 44 26 8 100 160
Kết quả ở bảng 3.5 cho thấy:
Với 45 mẫu phân lập không gây chết phôi khi tiêm qua phôi trứng, làm phản ứng HA, cả 45 mẫu ựều cho kết quả âm tắnh. Như vậy, trong các mẫu này không có sự có mặt của virus Newcastle.
Với 160 mẫu phân lập, khi tiêm cho phôi trứng có gây chất phôi. Các mẫu này khi làm phản ứng HA cả 160 mẫu ựều cho kết quả dương tắnh. Hiệu giá HA của các mẫu giao ựộng từ 2log2 ựến 6log2. Trong ựó, có 38 mẫu có hiệu giá HA là 2log2, 44 mẫu có hiệu giá 3log2, 44 mẫu có hiệu giá 4log2, 26 mẫu có hiệu giá 5log2, và 8 mẫu có hiệu giá 6log2.